[发明专利]一种应用转肽酶SortaseA修饰蛋白的方法

权利要求书

1.一种应用转肽酶SortaseA修饰蛋白或多肽的方法，其特征在于，利用特异性吸附转肽酶SortaseA的磁珠，将SortaseA固定至磁珠上，用于催化蛋白或短肽的连接、修饰反应。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将C端带有His₆标签的Sortase A的酶液与His Tag标签蛋白亲和镍磁珠进行结合。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，以磁珠固定SortaseA时，调整两者用量比例使磁珠达到吸附饱和。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转肽酶SortaseA是微生物发酵得到的酶液或者纯酶，或者商业化成品酶。

5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，酶液的pH调整为pH值5.0-8.0，将3mL以上活力为90.2mg/L的酶液与磁珠以体积比为6:1-30:1的比例混合，于4-25℃结合30min以上进行固定化。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述磁珠可采用His Tag标签蛋白螯合磁珠。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白或短肽的连接、修饰反应包括：蛋白与蛋白大分子之间的连接反应、蛋白大分子与小分子底物之间的连接反应、蛋白与树脂之间的连接反应、蛋白自身环化反应、短肽与蛋白大分子之间的连接反应、短肽与短肽之间的连接反应、短肽与树脂之间的连接反应、短肽自身环化反应。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述小分子底物包括荧光素标签分子、Biotin等生物亲和标签、特异性化学标记基团等。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酶液的获得，是以pET22a为表达载体，并利用载体上自带的PelB信号肽构建携带编码SortaseA的基因的重组表达载体，将重组表达载体与分子伴侣pG-Tf2质粒共同转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)得到重组菌，在TB培养基中，30℃诱导培养重组菌36h后获得90.2mg/L的胞外C端带有His₆标签的SortaseA酶液。

10.一种固定化转肽酶SortaseA，其特征在于，利用特异性吸附转肽酶SortaseA的磁珠，将SortaseA固定至磁珠上。