[发明专利]发酵培养基及生产表阿霉素的方法

权利要求书

1.生产表阿霉素的方法，其特征在于，其包括下述步骤：

（1）将波塞链霉菌工程菌活化后，接种到种子培养基中培养，得到种子液；

（2）将种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养，然后从发酵液中分离出表阿霉素，即可；

所述波塞链霉菌工程菌通过将含有酮基还原酶基因的重组载体转化波塞链霉菌（Streptomyces peucetius）构建而成，所述酮基还原酶基因的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID No.1~9所示，所述的波塞链霉菌为基因修饰后破坏dnmV基因的dnmV破坏株，所述dnmV破坏株含有dnmV基因破坏用质粒，所述dnmV基因破坏用质粒的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.28所示；

所述发酵培养基包括有机碳源、氮源、无机盐和水，按发酵培养基的总体积计，所述的有机碳源含量为50-220g/L；所述的氮源含量为15-50g/L；所述有机碳源为麦芽糊精；所述氮源为酵母粉和/或热榨黄豆饼粉；

所述的发酵培养基的pH值为5.0-8.5；

在步骤（1）中，所述培养的温度为20℃-40℃，所述培养的时间为24-72小时；

在步骤（2）中，所述的发酵培养的温度为25℃-32℃，所述发酵培养的时间为5-10天。

2.如权利要求1所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述波塞链霉菌工程菌活化为：将平板上的单菌落接种到斜面培养基上，在28℃-30℃的条件下培养5-10天。

3.如权利要求1所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，在步骤（1）中，以种子培养基的总体积计，所述种子培养基包括：5g/L的葡萄糖、30g/L的黄豆粉、1g/L NaCl、1g/LKH₂PO₄、1g/L MgSO₄·7H₂O；所述种子培养基的pH值为7.2。

4.如权利要求1所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述的种子液的用量为5%-15%，所述的百分比是指种子液的体积与发酵培养基的体积百分比。

5.如权利要求1所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述的发酵培养的温度为27℃-29℃。

6.如权利要求1所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，所述从发酵液中分离出表阿霉素按下述方式进行：将所述的发酵液进行酸化，用无水乙醇提取，离心取上清液，即可。

7.如权利要求1所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，所述的无机盐包括NaCl、CaCl₂和CaCO₃中的一种或多种；

和/或，按发酵培养基的总体积计，所述的无机盐的用量为8-9g/L；

和/或，所述的水为蒸馏水。

8.如权利要求7所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，按发酵培养基的总体积计，所述有机碳源的含量为70-220g/L；

和/或，按发酵培养基的总体积计，所述氮源的含量为15-45g/L；

和/或，每升发酵培养基中，所述无机盐包括：2g的NaCl、3g的CaCl₂和3g的CaCO₃；

和/或，所述的发酵培养基的pH值为5.5-8.0。

9.如权利要求8所述的生产表阿霉素的方法，其特征在于，按发酵培养基的总体积计，所述有机碳源的含量为140-160g/L或者200-210 g/L；

和/或，按发酵培养基的总体积计，所述氮源的含量为30g/L；

和/或，所述的发酵培养基的pH值为6.2-6.6。