[发明专利]简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法

说明书

本发明属药物检测与司法鉴定技术领域，涉及一种用于快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯：十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯的方法，该方法样品用量少，检材少至仅200μL，前处理过程简便、快速，采用HP‑5MS毛细气相色谱柱以及质谱检测器，测定人全血中6种脂肪酸乙酯含量，该方法灵敏度高、专属性强、线性范围宽，并且操作简单、快速、提取溶剂用量少，能够满足司法鉴定任务紧迫、对检测时间要求高的需求，易于操作和推广。

技术领域

本发明属药物检测与司法鉴定技术领域，涉及，具体涉及一种简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯(十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯)的方法。

背景技术

资料显示，乙醇滥用现象在当今社会已十分普遍，并对社会产生了诸多不良影响。在司法鉴定工作中，乙醇的检测对于交通事故等案件的原因调查和责任认定具有重要意义。但在实际案件中，由于乙醇代谢速度较快，且有时尸体腐败过程可能产生乙醇，使得检材中乙醇的检出情况不能真实反映饮酒情况。研究显示，脂肪酸乙酯，包括二十余种化合物，其中在人体内含量较高的有十四酸乙酯(ethyl myristate)、棕榈酸乙酯(ethylpalmitate)、硬脂酸乙酯(ethyl stearate)、油酸乙酯(ethyl oleate)、亚油酸乙酯(ethyllinoleate)、花生四烯酸乙酯(ethyl arachidonate)，是乙醇的非氧化代谢产物，其具有检测时限较长，不受腐败干扰的特点，业内认为其可作为乙醇的直接标志物。

目前公开的测定生物样品中脂肪酸乙酯的方法的检测对象仅为毛发、胎粪和血清，且存在样品前处理步骤繁琐、检材用量大等问题。全血是法医毒物鉴定中最为重要的一种生物检材，尤其对于涉及死亡的案例，由于死亡后溶血现象的发生，往往只能得到全血检材，而无法得到血浆或血清生物检材，迄今，尚未见有以全血为检测对象的分析方法的报道。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟建立一种简单、快速的全血中脂肪酸乙酯的测定方法，以满足司法鉴定的需要。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷，提供一种简便、快速而准确的能同时测定人全血中6种脂肪酸乙酯(十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯)的方法。

具体的，本发明提供了一种简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法，其包括步骤，

(1)血液样品预处理

取待检对象全血检材，加入内标十七烷酸乙酯溶液，加入乙醇及正己烷，涡旋混合，离心后，转移上层有机相，取进样；

(2)采用气相色谱－质谱联用法对待检对象全血中6种脂肪酸乙酯进行定性、定量分析。

本方法中，血液样品为人全血检材，本发明的实施例中，血液样品取样量为200μL；

本方法样品预处理中，取待检血液样品，加入内标十七烷酸乙酯液10μL，加入1mL乙醇及0.3mL正己烷，涡旋混合5min，12000rpm离心5min，转移上层有机相，取3μL进样；

本方法中，采用气相色谱－质谱联用法(GC-MS)对预处理的人全血中6种脂肪酸乙酯进行定性、定量分析。

本方法中，GC-MS操作条件为：

色谱柱：HP-5MS弹性石英毛细管气相色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm

柱温：起始100℃维持1.5min，然后25℃/min升至280℃并保持6min

溶剂延迟时间：5min

进样口/传输线温度：250℃/280℃

载气：高纯He，恒流1mL/min