[发明专利]一种伊曲茶碱有关物质的高效液相色谱分析方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种化学药物纯度的分析方法，具体地说是一种伊曲茶碱有关物质的高效液相色谱分析方法。

二、背景技术

伊曲茶碱(Istradefylline)，化学名为(E)-8-(3,4-二甲氧基苯乙烯基)-1,3-二乙基-7-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮，化学结构式如下：

伊曲茶碱是一种选择性的腺苷A2A受体拮抗剂，由日本Kyowa Hakko Kirin公司开发。伊曲茶碱片(商品名Nouriast，规格20mg)于2013年3月获日本PMDA批准上市，临床用于治疗帕金森病和改善帕金森综合症初期的运动障碍，尤其适用于改善因左旋多巴治疗引起的剂末现象。

伊曲茶碱杂质较多，从结构上看，杂质主要来源于取代嘌呤母核结构改变及其侧基苯乙烯结构异构化有关，杂质均具有苯乙烯结构，极性相近杂质诸多；从来源看，伊曲茶碱原料的杂质主要来源于合成过程中引入的反应原料(杂质H)、合成中间体(杂质D)、反应副产物(杂质E、杂质F、杂质G)及降解杂质(杂质A、杂质B、杂质C)，伊曲茶碱制剂的杂质来源于原料引入杂质(杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H)、工艺杂质(杂质B)及降解杂质(杂质A、杂质B、杂质C)。

目前建立在全面杂质谱分析基础上的伊曲茶碱原料及其制剂的分析方法还没有相关的文献报道。

三、发明内容

本发明针对现有文献对伊曲茶碱原料及其制剂杂质鉴定研究的缺失，旨在提供一种伊曲茶碱有关物质的高效液相色谱分析方法。本发明通过工艺试制、强制降解试验对伊曲茶碱杂质进行富集、分离提纯，鉴定了8个主要已知杂质，并且对杂质进行了溯源归属，包括伊曲茶碱反应原料(杂质H)、合成中间体(杂质D)、伊曲茶碱合成副产物(杂质E、杂质F、杂质G)及降解杂质(杂质A、杂质B、杂质C)。

发明人曾试图通过C18(150×4.6mm，5μm)色谱柱分离各已知杂质，但各杂质与主成分不能达到基线分离，不合适。因此，改用C18(250×4.6mm，5μm)的色谱柱进行分离，经对流动相组成及比例的优化筛选，确定本发明的分析方法。同时按中国药典2015年版四部通则<0512>(高效液相色谱法)及通则<9101>(药品质量标准分析方法验证指导原则)的定义和验证方法，进行专属性验证，结果表明该方法可同时分析伊曲茶碱原料及其制剂中的所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成份自身对照法有效控制各已知杂质含量，各杂质峰与主峰之间的分离度大于1.5，主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。

所述峰纯度是指采用配有相应分析软件的光二极管阵列检测器，采集、记录、分析经色谱柱分离组份的光谱数据，自动生成的表征特定分离组份对应的光谱特征一致性的加权值。

本发明伊曲茶碱有关物质的高效液相色谱分析方法，采用反相色谱柱及紫外检测器，是以乙腈-磷酸盐缓冲液的混合溶液为流动相，进行等度洗脱，包括如下步骤：

(1)样品配制：取伊曲茶碱原料或制剂粉末，用乙腈和磷酸盐缓冲液的混合液超声溶解，过滤或离心，配制成浓度为0.1-1.5mg/ml的伊曲茶碱溶液；

(2)色谱条件设置：采用反相C18柱，柱温设置在20-50℃；以乙腈和磷酸盐缓冲液的混合液为流动相，进行等度洗脱；流速为0.5-2.0ml/min；检测波长为210-270nm；

(3)检测：取步骤(1)配制的伊曲茶碱溶液，进样10-50μl，记录色谱图。

步骤(2)中反相C18柱选自Grace Smart C18(250×4.6mm，5μm)、Agilent C18(250×4.6mm，5μm)或Diamonsil C18(250×4.6mm，5μm)，优选Diamonsil C18(250×4.6mm，5μm)。

步骤(1)乙腈和磷酸盐缓冲液的混合液中乙腈与磷酸盐缓冲液的体积比为1∶1。

步骤(2)流动相中乙腈与磷酸盐缓冲液的体积比为50∶49-54，优选50∶50。

步骤(1)或步骤(2)中所用磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾的水溶液，磷酸二氢钾的浓度为0.01-0.5mol/L，优选0.05mol/L，用氢氧化钾调pH值至5.0-7.0，优选5.9-6.3。

步骤(2)中流速为0.8-1.2ml/min，检测波长为225-235nm。

步骤(3)中进样量为20μl。