[发明专利]微小病变型肾病的早期诊断生物标记物、试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术与医学领域，具体涉及一种微小病变型肾病的早期诊断的生物标记物、试剂盒及其应用。

背景技术

微小病变型肾病(minimal change nephropathy，MCD)是以大量蛋白尿、低蛋白血症、水肿，高脂血症为基本特征的肾病综合征的多种类型之一。好发于儿童，占儿童原发性肾病综合征的80％左右，占成人原发性肾病综合征的5％-10％。微小病变型肾病对糖皮质激素的治疗敏感，但极易复发，易转变为激素耐药或激素依赖，临床治疗较为棘手。并且该病强调个体化治疗，即针对不同个体及同一个体的不同病程的病理改变来调整治疗方案。因此，对微小病变型肾病的正确的早期诊断尤为重要。微小病变型肾病在光镜下肾小球无明显病变，免疫荧光阴性，只有通过电镜下特征性改变，即广泛的肾小球脏层上皮细胞足突融合来进行确诊。而电镜学技术检查费用高、诊断用时长，目前国内医疗机构尚未广泛普及。该病的特点决定了病理诊断的困难，从而容易错过患者的最佳治疗时机。同时，在出现激素耐药或激素依赖时，则应及时注意病理类型的改变。因此，一种可以在早期有效并且简易的诊断微小病变型肾病的方法的出现，对患者至关重要。

另一方面，在肾小球疾病的不同病理类型中，除膜性肾病(membranous nephropathy，MN)和微小病变型肾病这两者，多数在光镜下可见肾小球结构的异常变化。临床膜性肾病可以通过免疫荧光技术来进行诊断，但免疫荧光显微镜相对普通显微镜昂贵。如果能够通过免疫组织化学染色在普通光镜下即可观察到该病的特征性病变，不仅有助于对两种疾病的鉴别，也有助于进一步快速的确定膜性肾病的诊断，从而为临床医生制定针对性的治疗方案提供可靠的依据。

发明内容

鉴于上述现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种微小病变型肾病的早期病变有密切的关系并能够独立用于检测微小病变型肾病早期病变的生物标记物，并将其应用于制造微小病变型肾病的早期诊断试剂盒。

本发明目的是通过如下技术方案来实现的。

一种微小病变型肾病的早期诊断生物标记物，所述生物标记物为STMN1蛋白。

本发明还提供所述的生物标记物在制造用于微小病变型肾病的早期诊断的试剂盒中的应用，其包括以下步骤：

(1)准备取自受试者的待测样品和对照品；

(2)对步骤(1)的待测样品和对照品中的STMN1蛋白进行定量测定，得到样品值和对照值；

(3)将步骤(2)中得到的所述样品值和所述对照组进行比较，所述样品值高于所述对照值，则判断所述受试者伴有微小病变型肾病。

进一步地，所述的受试者的待测样品取自患有肾小球损伤患者的肾组织，所述对照品取自肾切除术患者的正常肾组织。

进一步地，在步骤(2)中使用免疫组织化学染色法对所述STMN1蛋白进行定量测定。免疫组织化学染色法的检测结果根据STMN1蛋白阳性细胞的染色强度和所述阳性细胞占所有同类细胞的百分比中和判断。本发明中根据对于STMN1蛋白的免疫组织化学染色的定性结果，也可以判断受试者是否为伴有微小病变型肾病患者。

上述所述的待测样品和对照品可以为任何类型的离体肾组织或细胞样本，包括新鲜采集的肾穿刺活检组织、福尔马林固定石蜡包埋的肾组织、OCT包埋的冷冻肾组织，液氮保存的新鲜无固定肾组织等。无论应用于哪种类型的生物样本，本领域的技术人员可以根据现有技术信息确定样品的前处理方法，使处理后的样品适用于利用免疫组织化学染色法对所述STMN1蛋白进行定性和定量测定。

本发明所述的试剂盒，包括抗STMN1抗体。抗STMN1抗体只要对STMN1蛋白具有特异的结合性，则其种类或来源等没有特别限制。另外，可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体。

进一步地，所述试剂盒还包括封闭待测样品组织的封闭液、与STMN1抗体特异性结合的生物标记二抗、与生物标记二抗进行显色反应的显色剂。为了检测直接、简便、高灵敏度的目的，优先使用利用结合有标记物的二次抗体的方法、利用二次抗体与标记物质结合而成的聚合物的方法等间接的检测方法。

此处的二次抗体是指对抗STMN1抗体具有特异性结合的抗体。二次抗体可以使用来源于兔、山羊、小鼠等的市售的具有标记物的二次抗体。

进一步地，所述封闭液含有5wt％山羊血清、1wt％BSA、0.01wt％聚乙二醇辛基苯基醚和pH7.4的磷酸缓冲液，所述生物标记二抗为生物素化二抗，所述显色剂含有辣根酶标记链霉卵白素和DAB显色试剂。

进一步地，所述试剂盒还包括作为复染剂的苏木精染色液。