[发明专利]ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用及其试剂盒

说明书

本发明提供了一种ABCC3‑013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用，ABCC3‑013 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。其可通过检测患者体内（例如外周血）ABCC3‑013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗，为辅助临床治疗、判断预后及疗效提供新方法。本发明还提供了检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，其可通过检测患者体内（例如外周血）ABCC3‑013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗。临床实验表明其诊断敏感性为52%，特异性为86%。

技术领域

本发明涉及一种检测药物抵抗的试剂盒，尤其是一种检测氯吡格雷抵抗的试剂盒。

背景技术

氯吡格雷作为抗血小板药物，是冠心病患者经皮冠状动脉介入术 (PCI)植入支架后，用来预防支架内血栓发生的最常用药物，与阿司匹林合用所组成的“双抗血小板治疗”方案是急性冠脉综合征和PCI植入支架后的“金标准”抗血小板治疗方案。氯吡格雷抵抗（或耐受）出现在10-40%的服用氯吡格雷治疗的病人，表现为氯吡格雷的抗血小板作用达不到预期的要求，导致药物疗效差。

现有的血小板聚集试验和血栓弹力图法可在一定程度上评价氯吡格雷抵抗；但是血小板聚集试验重复性较差；血栓弹力图的检测方法的不统一、评价标准不统一，并不能据此指导临床治疗。

目前所采用的病人外周血白细胞DNA检测CYP2C19基因型的方法，仅能反映约10%的病人在服用氯吡格雷后临床疗效的个体差异，诊断或预测价值有限。氯吡格雷抵抗的机制尚不十分清楚，临床上也缺少有效的氯吡格雷抵抗的标记物。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的氯吡格雷抵抗的标记物在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用，以辅助临床治疗、判断预后及疗效。

本发明的另一个目的是提供一种检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，以辅助临床治疗、判断预后及疗效。

本发明提供了一种ABCC3-013 mRNA在制备检测氯吡格雷抵抗的试剂盒中的应用，ABCC3-013 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，其包括对应于ABCC3-013 mRNA的特异性引物、探针、和/或芯片，ABCC3-013 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在检测氯吡格雷抵抗的试剂盒的另一种示意性实施方式中，特异性引物包括SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物。

在检测氯吡格雷抵抗的试剂盒的另一种示意性实施方式中，还进一步包括：TRIZOL试剂，氯仿，异丙醇，DEPC水，Oligo dT引物，随机6核苷酸引物，反转录酶，无RNA酶水，反转录缓冲液，Taq 酶，dNTP，Mg²⁺，SYBR Green I，和ROX参比染料。

多药耐药相关蛋白（MRP3）是ABCC3基因（ATP binding cassette，subfamily C，member 3）表达的产物。临床研究表明，MRP3的高表达与多种抗癌化疗药物的治疗耐受有关。ABCC3基因在RNA转录水平上因剪接变异而产生多种mRNA剪接变异体，其中ABCC3-013剪接变异体是ABCC3基因由于点突变导致mRNA剪接异常而产生的非野生型mRNA剪接变异体。ABCC3-013剪接变异体能够增强MRP3蛋白介导的转运活性。临床研究显示，氯吡格雷抵抗的病人的ABCC3-013 mRNA表达水平显著高于氯吡格雷反应敏感（或正常）的病人的表达水平。因此，可以通过检测患者体内（例如外周血）ABCC3-013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗，辅助临床治疗、判断其疗效和预后。

本发明提供了检测氯吡格雷抵抗的试剂盒，其可通过检测患者体内（例如外周血白细胞）ABCC3-013 mRNA表达水平来检测患者的氯吡格雷抵抗。临床实验表明其诊断敏感性为52%，特异性为86%，可有助于辅助临床治疗、判断其疗效和预后。