[发明专利]一种新的新城疫卵黄抗体代替血清抗体监测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及卵黄抗体监测技术领域，具体涉及一种新的新城疫卵黄抗体代替血清抗体监测的方法。

背景技术

新城疫是最常见的家禽传染病之一，可引起家禽大批死亡或生产性能下降，可造成养禽业(包括鸡、鸭、鸽、鹌鹑等)的巨大经济损失。通过疫苗免疫是我国新城疫最主要的防控措施，免疫产生的抗体效价高低直接决定着免疫质量和防控成败。由于免疫接种容易受到多种因素的影响，如疫苗因素、动物因素、饲养管理因素、疾病因素等，而且动物的免疫反应看不见、摸不着，所以免疫质量存在很大的不确定性，这给疫病防控带来极大的困难。抗体监测是检验免疫质量最直接、最有效的方法，通过抗体监测可以确定科学的免疫程序、合理的免疫时间，选择优质的疫苗、准确的免疫剂量，从而确保免疫效果。抗体监测还可以提示新城疫发生的风险，如果抗体效价低于4log2，鸡群的抗体不足以抵抗病毒的侵袭，发病的风险增大，定期进行新城疫抗体监测可以评估疫苗免疫质量和预警疫病的发生，是预防控制新城疫的重要措施。

抗体监测是利用免疫学试验的原理，用已知抗原检测相应特异性抗体的方法，其在免疫质量评估、疫病诊断、疫病监测、疫情预警、疫病控制等方面发挥重要作用，是动物疫病防控的主要技术手段。抗体监测主要以血清抗体效价为标准，利用血清学试验检测血清抗体，常用的方法有血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等，其中HA和HI是新城疫抗体监测的最常用方法。血清抗体监测具有结果准确、可靠的优点，但同时具有操作繁琐、影响鸡健康和生产性能的缺点。因为需要采血和分离血清，操作过程繁琐，浪费人力和时间，同时采血引起的应激会给养鸡生产造成不良影响，从而导致血清抗体监测在实践应用中受到一定的限制。然而，与血清制备相比，卵黄制备更加简便和安全，只需要收集鸡蛋，不需要采血，所以用卵黄代替血清 进行抗体监测具有一定的优势和推广价值，我国早在20世纪80年代就有用卵黄抗体代替血清抗体进行新城疫抗体监测的报道。

卵黄抗体(IgY)是禽类在抗原刺激下产生的沉积于卵黄中的针对特定抗原的抗体，是禽类在长期进化过程中形成的用于提高雏禽抵抗力的物质。当家禽受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环；当血液流经卵巢时，特异性抗体选择性地(主要是IgG)转移并沉积到卵黄，形成卵黄抗体；IgG在卵细胞中具有蓄积作用，所以卵黄抗体的浓度高于血清中的抗体浓度。自1893年KIemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来，人们对卵黄抗体的认识不断加深，相关研究也愈来愈受到关注，其中用卵黄抗体代替血清抗体进行抗体监测是其中内容之一。当前用于检测新城疫卵黄抗体的方法有多种，如氯仿提取法、生理盐水提取法、磷酸盐缓冲液提取法等，其中氯仿提取法使用最多。虽然氯仿提取法是使用最普遍的卵黄处理方法，但是结果仍然存在准确性和稳定性的问题，这是卵黄抗体代替血清抗体进行新城疫抗体监测最大的难题。卵黄抗体监测虽然具有操作简便、安全的优点，但同时具有结果不准确、不可靠的缺点。

卵黄抗体是指禽类经免疫后卵黄内含有的特异性抗体；血清抗体是禽类经免疫后血清内含有的特异性抗体；血凝抑制试验是指某些具有凝集红细胞能力的病毒(或抗原)能被相应抗体抑制，原理是相应抗体与病毒(或抗原)结合后，阻止病毒(或抗原)表面血凝素与红细胞结合，常用于正粘病毒、副粘病毒的诊断和抗体监测；抗体监测是通过免疫学实验的方法，即用已知抗原检测被检样品中有无相应的特异性抗体，其主要作用是检验免疫性与免疫效果，对于抗体监测中发现免疫效果不好则可提示需要加强免疫或调整免疫程序，是动物疫病预防控制工作中重要的技术手段，具备重要的参考价值，并非疾病的诊断与治疗方法。

在禽类疫病的抗体监测中，血清抗体检测结果可靠众所周知，但是血清抗体监测需要采血，在生产中有一定的技术难度，还会产生应激，影响家禽的健康和生产性能；卵黄抗体检测不需要采血，只需要提供禽蛋，不会产生应激，不会影响家禽的健康和生产性能。新城疫病毒的抗体监测一直以血清抗体效价 为标准，而卵黄抗体效价与血清抗体效价存在一定的差距，致使卵黄抗体检测在生产中得不到推广应用。卵黄抗体的效价的确定是卵黄代替血清的关键点，相较于血清抗体的效价检测技术非常成熟，卵黄抗体存在于卵黄中，属于非均相液态物混合，现有的技术很难保证卵黄抗体检测结果的可靠性，往往不是偏低就是偏高，单一方法很难保证所得的卵黄抗体效价的可靠性。

申请人通过实验发现，针对卵黄进行新城疫抗体效价监测，用氯仿处理一般效价偏低，而用水处理一般效价偏高，申请人认为其基于以下的机理：