[发明专利]一种用于肝癌早期筛查和诊断的多种自身抗体联合检测ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种用于肝癌早期筛查和诊断的多种自身抗体联合检测ELISA试剂盒。

背景技术

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，而每年的新发肝癌病例有一半以上是在中国，严重威胁着人们的生命健康。肝癌起病很隐匿，预后差。手术切除和肝移植等方式被认为是肝癌根治性治疗的手段，但大多数患者在被初次诊断时，便已进入肝癌晚期，因而失去了治疗的机会。其中最主要的原因是早期肝癌患者通常无明显症状，或者体积很小，影象学检查较难察觉，而甲胎蛋白(AFP)作为主要的血清标记物，又存在敏感性低的缺点，以至于在美国肝病研究学会(AASLD)2010年发布的《临床肝细胞癌指南更新版》中，已不再推荐AFP作为肝癌的筛查指标。研究者们在肝癌的分子层面进行研究，为肝癌的分子诊断以及术后个体化治疗方案的制定等提供重要的理论依据。

目前最新的恶性肿瘤早期检测方法有多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C12芯片)、肿瘤基因突变检测试剂盒、六项肿瘤标志物测定试剂盒、人恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒。但是，多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C12芯片)的检测假阳性较高，且没有具有针对性的肝癌检测标志物，检测效率低。肿瘤基因突变检测试剂依靠聚合酶链式反应(PCR)这样繁复的操作,且容易产生假阳性，是一种不可靠的分析方法。六项肿瘤标志物测定试剂盒和人恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒，只能测出患者有肿瘤，但不能判断肿瘤的具体类型。

近年来，在人类肿瘤学的研究领域内，许多研究已经发现癌症患者血清中含有一组独特的诱发自身抗体反应的细胞蛋白，被称为肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)，其诱导产生的抗体称为抗TAA-抗体(autoantibody)。这一概念的提出对肝癌早期诊断研究指引了一个新的方向。1998年，在美国Scripps研究所的张博士发现了一种新的肿瘤相关抗原p62。这种被称为p62的TAA能够激发人体产生免疫反应，产生自身抗体，具有重要意义的是抗p62自身抗体在肝癌患者循环系统出现的时间：使用从慢性肝炎发展到肝硬化再到肝癌的序列血清，发现抗p62自身抗体在患者的慢性肝炎阶段没有出现，在肝硬化的前期、中期也没有出现，而在肝硬化阶段的晚期肝癌发生前的一段时间含量急剧升高，而此时尚未出现肝癌的临床症状和体征，临床上尚不能发现肝癌，并且这一现象在多个肝癌患者的序列血清中得到重复。这就说明，抗p62自身抗体是一个有潜力的能够早期诊断肝癌的血清学标志物。随后对小样本的肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者和正常人的血清检测抗p62自身抗体进行检测，结果显示这种自身抗体的特异度很高，但是灵敏度尚不能达到20％。显然，如果单独以抗p62自身抗体作为诊断肝癌的标志物，诊断价值较低。研究者在接下来的工作中，试图寻找更加灵敏和特异的抗TAA自身抗体，可是结果不够理想。在2003年的一项使用7种抗TAA自身抗体检测肝癌的研究中，单个指标的灵敏度不超过20％，但是通过并联这7种TAA自身抗体，检测的灵敏度可以达到56.9％，而诊断的特异度仍然很高。说明联合多个TAA自身抗体具有较高的诊断价值，是一种有应用潜力的策略。

十余年来的后续研究一直试图寻找诊断肝癌更加敏感特异的抗TAA自身抗体，优化诊断肝癌的组合。寻找有价值的TAA自身抗体，常用的方法有两种：一是重组cDNA表达文库血清学筛选(serological analysis of recombinant cDNA expression libraries,SEREX)；另一种是蛋白质组学技术。