[发明专利]一种集分离方法开发、在线分离‑富集于一体的天然药物二维制备色谱仪及其工作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种集分离方法开发、在线分离-富集于一体的天然药物二维制备色谱仪及其工作方法，属于天然药物成分分离技术领域，应用于植物药、中药、海洋药物等的研发领域。

背景技术

色谱分离技术对于分离制备来自植物、海洋生物、中药及生物工程等的天然产物用于创新药物、精细化学品研究的重要性已勿容置疑。基于传统中药创制新药以及中药药理活性成分的发现、机理研究的关键是中药有效成分的可重复、系统性的分离制备。

天然药物组成复杂，单次色谱分离效果有限，需要经过多次分离，在分离过程中使用不同色谱分离模式可以达到满意结果。在以往的天然产物研究过程中，虽然已积累了丰富的经验，但对于系统性研究中药等天然药物成分仍有缺乏有效的装备。近年来，二维色谱技术的发展，采用几种模式填料的互补性性分离无疑对于解决这一问题铺平了道路。而将其实现自动化，在实现部位分离并进行在线富集后直接进行纯化合物制备可以简化分离制备过程，最大限度的提高工作效率。邵平（CN101791491A）设计了一套低、中、高压结合的二维制备色谱系统，通过六通阀和软件将两套制备色谱系统连接起来，完成样品的二维色谱分离，适合于分离已知成分和用于解决过载进样和分离能力间的矛盾，并不不适合中药等复杂体系。张维冰设计了一种准动态二维制备色谱系统及物质分离方法（CN102914610A，CN202870047U），通过三通阀将两根制备色谱柱连接，通过阀切换将第一维制备色谱柱分离的组分转移到第二维制备色谱柱进行分离。李贺然、肖红斌公开了（CN102961892A、CN104713973A）采用2位10通阀和多个2位六通阀的在线富集色谱仪分离天然药物成分的方法。在一定程度上解决了问题，但在分离方法开发、分离效率及可重复获得有效部位、有效部位的系统性分离及分离过程的自动化控制上仍存在不足。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种集分离方法开发、在线分离-富集于一体的天然药物二维制备色谱仪及其工作方法，该装置是对中药、植物药、海洋药物等复杂物质体系进行系统性、规模化及连续化分离制备的智能化系统，在有效进行样品分离方法开发与优化的基础上，采用计算机控制，过渡到样品的分离制备，增加了分离效率和针对性，一维、二维色谱的正交性分离和分离后样品富集模式的设计，极大地提高了制备色谱对于诸如中药等复杂物质体系的分离制备能力，可重复获得的有效部位、有效成分单体，对于中药新药开发，药理活性研究具有重要意义。

本发明提供的的技术方案是：一种集分离方法开发、在线分离-富集于一体的天然药物二维制备色谱仪

该分离装置由3台高压泵、1个两位六通阀进样器、1个两位八通阀、1个六通阀，3个十通阀、1个紫外检测器、1个混合器、2个可供选择的一维分离柱、2个可供选择的二维分离柱、1个用于方法开发的色谱柱，18个一维富集柱、9个二维富集柱、控制软件、馏分收集仪和连接管线组成。

其中两位八通阀负责分离方法开发、一、二维分离-富集模式的切换；六通阀进行分离方法开发柱，一维分离色谱柱、二维分离色谱柱选择性切换；3个十通阀实现一维、二维富集柱选择；紫外检测器监测方法开发、分离制备的色谱过程；馏分收集仪用来收集分离制备的馏分。

它包括控制系统、泵入系统、进样系统、检测系统、一维色谱柱系统、二维色谱柱系统和二位八通阀，所述二位八通阀包括A口、B口、C口、D口、E口、F口、G口和H口，所述泵入系统包括第一泵、第二泵和混合器，混合器连接有泵入系统输入管，所述进样系统包括进样系统输入管、二位六通进样阀、进样系统输出管，所述检测系统包括依次设置的检测系统输入管、六通柱选择阀、检测仪、三通混合器和检测系统输出管；所述一维色谱柱系统包括一维色谱柱输入管、一维色谱柱和一维色谱柱输出管；所述二维色谱柱系统包括二维色谱柱输入管、二维色谱柱和馏分收集器；稀释液泵连接至三通混合器；控制系统与第一泵、第二泵、稀释液泵、二位八通阀、二位六通进样阀、三个十通柱选择阀、检测仪进行电连接，控制系统控制第一泵、第二泵和稀释液泵的开启和停止，控制系统控制二位八通阀、二位六通进样阀、十通阀的通断切换；

所述色谱仪通过控制二位八通阀的连接呈第一连接状态或第二连接状态，实现分离方法开发、样品一维和二维色谱分离；