[发明专利]一种人食管癌细胞系及其应用

权利要求书

1.一种人食管癌细胞，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201661。

2.如权利要求1所述的人食管癌细胞的子代细胞。

3.如权利要求1或2所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，用于制备在非人类的哺乳动物中产生食管癌肿瘤的试剂。

4.如权利要求3所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，所述的哺乳动物为免疫缺陷小鼠。

5.如权利要求4所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，所述的免疫缺陷小鼠为免疫功能重建的免疫缺陷小鼠。

6.如权利要求4所述的人食管癌细胞的用途，其特征在于，所述的免疫缺陷小鼠包括裸小鼠或SCID鼠。

7.一种如权利要求1或2所述的人食管癌细胞的建立方法，其特征在于，包括以下步骤，

1)获得新鲜的临床食管癌手术切除标本，切成20～50mg的小块，皮下穿刺接种哺乳动物；

2)穿刺接种70～90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。

8.如权利要求7所述的方法，进行所述皮下穿刺接种前，所述的新鲜的临床人食管癌切除标本用HBSS缓冲液漂洗，所述的HBSS缓冲液包括500U/ml的青霉素G、500μg/ml的硫酸链霉素和1.25μg/ml的两性霉素B；

所述的原代培养方法包括以下步骤：将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加PC-1培养液，静置培养；待细胞铺展到占培养瓶表面70％满时进行传代培养和纯化；

所述传代培养包括以下步骤：吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，向瓶内加入新鲜的PC-1培养液，当细胞传代到第十代以后，将培养液更换为RPMI1640培养液，所述RPMI-1640培养 液包含10％(w/w)胎牛血清、10μg/mL青霉素G和2μM氢化可的松，所述百分比为质量百分比；所述纯化的方法为差速贴壁。

9.一种筛选治疗食管癌候选药物的体内实验方法，其特征在于，其包括以下步骤：将测试化合物施用于动物模型，施用后导致食管癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗食管癌候选化合物，所述的动物模型具有权利要求1或2所述的人食管癌细胞所导致的食管癌肿瘤。

10.一种筛选治疗食管癌候选药物的体外实验方法，其特征在于，其包括以下步骤：将测试化合物以不同浓度直接施用于权利要求1或2所述的人食管癌细胞，根据对肿瘤细胞增殖的抑制效果，判断测试化合物对食管癌的抗肿瘤能力。