[发明专利]一种测定乐舒洗液中苦参碱含量的SPE‑HPLC法

权利要求书

1.一种测定乐舒洗液中苦参碱含量的SPE-HPLC法，其特征在于：包括以下步骤：

A、对照品溶液的制备：称取苦参碱对照品，用甲醇定容，制成对照品储备液，将苦参碱对照品储备液逐级稀释，制备成系列浓度对照品工作液；

B、供试品溶液的制备：

B1、取乐舒洗液超声处理，摇匀，滤过，取滤液备用；

B2、取滤液过已活化的Bond Elut plexa PCX混合型强阳离子交换小柱，依次用0.5mol·L^-1盐酸、甲醇和体积浓度为50%甲醇溶液洗涤，弃去洗液，抽干，最后用氨水-甲醇溶液洗脱，氨水-甲醇溶液中氨水与甲醇的体积比为2∶8，控制流速在1～1.5 mL·min^-1，取洗脱液置于80～95℃水浴中空气吹干，精密加入流动相，涡旋震荡使溶解残渣，即得供试品溶液；

C、液相色谱检测：待仪器状态稳定后，用步骤A制备的对照品工作液进样，液相色谱检测，在此基础上，对步骤B制备的供试品溶液进行液相色谱检测；

液相色谱柱选用Diamonsil-C₁₈柱，5.0 μm，250 mm×4.6 mm；

检测条件：

柱温30℃；

测定波长：220 nm；

进样量：20 μL；

流动相：0.3%三乙胺-四氢呋喃-乙腈溶液，其中0.3%三乙胺、四氢呋喃、乙腈的体积比为78∶2∶20，所述的0.3%三乙胺用磷酸调pH值为6.9；

流速：1.0 mL·min^-1；

D、标准曲线的建立：以对照品工作液的进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；

E、样品测定：将测定的供试品溶液的苦参碱的峰面积，代入标准曲线方程，计算得到供试品溶液中的苦参碱含量；

步骤B1中，超声处理的条件为功率400W，频率40kHz，超声处理的时间为25～35min；

步骤B2中，0.5mol·L^-1盐酸、甲醇和体积比50%甲醇溶液的用量分别为10～15mL；氨水-甲醇溶液的用量为18～25 mL。

2.根据权利要求1所述的一种测定乐舒洗液中苦参碱含量的SPE-HPLC法，其特征在于：步骤B2中，Bond Elut plexa PCX混合型强阳离子交换小柱规格为500 mg，6 mL，其活化是先后用10 mL甲醇、5 mL 0.5mol·L^-1 盐酸溶液冲洗。

3.根据权利要求1所述的一种测定乐舒洗液中苦参碱含量的SPE-HPLC法，其特征在于：步骤D中，对照品工作液的浓度为76.5μg·mL^-1、102.0μg·mL^-1、153.0μg·mL^-1、204.0μg·mL^-1、306.0μg·mL^-1、408.0μg·mL^-1。

4.根据权利要求1所述的一种测定乐舒洗液中苦参碱含量的SPE-HPLC法，其特征在于：步骤A中，对照品储备液的浓度为5000μg·mL^-1。