[发明专利]肽或其盐及其制备方法

权利要求书

1.肽或其盐的制备方法，所述肽选自VVYP、AVLP和IGFP，其中

Y代表：L-酪氨酸；

V代表：L-缬氨酸；

P代表： L-脯氨酸；

A代表：L-丙氨酸；

L代表：L-亮氨酸；

I代表：L-异亮氨酸；

G代表：L-甘氨酸；

F代表：L-苯丙氨酸；

该方法包括：

步骤A：以树脂作为起始原料，在碱性试剂的存在下，将具有α-氨基保护基团的构成肽的C端的氨基酸连接至树脂，其中，所述树脂为2-氯三苯甲基氯树脂；碱性试剂选自：N,N-二异丙基乙氨和N-甲基吗啉；所述具有α-氨基保护基团的构成肽的C端的氨基酸为Fmoc-L-Pro-OH，

步骤B：用脱帽试剂将所述保护基团脱去，

步骤C：在碱性试剂和偶联试剂存在下，按照肽的从C端到N端的顺序依次连接组成肽的各个氨基酸进行反应，从而形成肽连接树脂，其中，每个氨基酸的连接都是先连接具有α-氨基保护基团的氨基酸进行接肽，然后用脱帽试剂将所述保护基团脱去进行脱帽，其中，碱性试剂选自： N,N-二异丙基乙氨和N-甲基吗啉；偶联试剂为O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐和1-羟基苯并三唑；

在步骤A和步骤C中，具有α-氨基保护基团的氨基酸的投料量为，以摩尔数计，是所连接的树脂的1.5~6倍；

在步骤A中，碱性试剂的投料量为（以摩尔数计）是所连接的树脂的2~10倍；在步骤C中，在连接每个氨基酸的接肽反应中， HBTU的投料量与具有α-氨基保护基团的氨基酸的量相等；HOBT的投料量为，以摩尔数计，是具有α-氨基保护基团的氨基酸的1.1~5倍；碱性试剂的投料量为，以摩尔数计，是具有保护基团的氨基酸的2~10倍；

步骤D：进行切肽，得到肽或其盐的粗品，

步骤E：纯化粗品，得到所述的肽或其盐，其中，

在步骤A-E中，氨基酸的α-氨基保护基团均为Fmoc；接肽试剂选自二氯甲烷，N,N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲基乙酰胺，四氢呋喃和乙酸乙酯中的一种或更多种；脱帽试剂为哌啶:N,N-二甲基甲酰胺等于1：2~10（体积比）；脱帽试剂的加入量和待脱帽的树脂的重量比例是5~25 ml脱帽试剂/g树脂，

其中，所述各步骤中接肽反应的温度是10~35 °C，反应时间是0.5~8 小时，脱帽反应的温度是20~35 °C，反应时间是5~60分钟，

所述各步骤中切肽试剂是三氟乙酸、三异丙基硅烷和水的混合物，三氟乙酸的比例是90~95%，三异丙基硅烷的比例是0~5%，水的比例是0~5%，在20~35 °C切肽反应1~5小时。

2.在权利要求1的制备方法，其中，所述步骤E中的纯化是利用纳滤机进行的。

3.权利要求1-2中任一项的制备方法，其中，所述步骤D中利用氮气吹干的方法得到了浓缩的粗品。

4.权利要求1-3中任一项的制备方法，其中，所述肽选自：

VVYP，

其中

Y代表：L-酪氨酸；

V代表：L-缬氨酸；

P代表： L-脯氨酸；

所述肽的盐选自：硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、三氟乙酸盐、甲烷基磺酸盐、萘磺酸、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、2，5-二羟基苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

5.权利要求1-4中任一项的制备方法，其中，所述肽为VVYP，该方法包括：

步骤(1)：制备Fmoc-L-Pro-2-CTC树脂：

取2-CTC 树脂，用干燥的二氯甲烷浸泡，然后加入用接肽溶剂溶解的Fmoc-L-Pro-OH和N,N-二异丙基乙氨的混合物进行反应后，加入醇继续反应，抽干，洗涤，干燥，获得Fmoc-L-Pro-2-CTC树脂；

步骤(2)：制备Fmoc-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂：

在步骤(1)获得的Fmoc-L-Pro-2-CTC树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，洗涤；加入用接肽溶剂溶解的Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、HBTU、HOBT和N,N-二异丙基乙氨的混合物进行反应，抽干，洗涤，干燥，获得Fmoc-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂；

步骤(3)：制备Fmoc-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂：

在步骤(2)中获得的Fmoc-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂中，加入脱帽试剂进行反应，抽干，洗涤；加入接肽溶剂溶解的Fmoc-L-val-OH、HBTU、HOBT和N,N-二异丙基乙氨混合物进行反应，抽干，洗涤，干燥，获得Fmoc-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂；

步骤(4)：制备Fmoc-L-val-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂：

在步骤(3)获得的Fmoc-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC 树脂中，加入脱帽试剂进行反应，抽干，洗涤；加入接肽溶剂溶解的Fmoc-L-val-OH、HBTU、HOBT和N,N-二异丙基乙氨混合物进行反应，抽干，洗涤，干燥，获得Fmoc-L-val-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂；

步骤(5)：制备L-val-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC 树脂：

在步骤(4)获得中的Fmoc-L-val-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂中，加入脱帽试剂进行反应，获得L-val-L-val-L-Tyr(tBu)-L-Pro-2-CTC树脂。