[发明专利]抗EGFRvIII和CD3特异性双靶向抗体、含双靶向抗体表达盒的微环DNA及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药和诊疗领域，具体涉及一种抗EGFRvIII和CD3特异性双靶向抗体、含双靶向抗体表达盒的微环DNA及应用。

背景技术

表皮生长因子受体III型突变体(EGFRvIII)是EGFR的胞外段2-7外显子缺失(801bp，267aa)导致外显子1和8融合，并于融合处产生了一个新的甘氨酸，故在膜外形成了一个新的抗原决定簇，在脑胶质瘤、乳腺癌、非小细胞型肺癌、前列腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中表达率很高，而且这种突变体是肿瘤过程的产物，只在肿瘤细胞中出现。EGFRvIII缺失了EGFR胞外段的大部分配体结合区域，可以发生自体磷酸化，组成型激活酪氨酸激酶诱发下游一系列信号转导，导致细胞向恶性转化，它提高了细胞增殖、浸润能力，抑制细胞程序性死亡，与肿瘤的发生、发展有密切关系，而其在正常组织中不表达，因此是肿瘤诊断和靶向治疗理想的分子靶点。

近年来，在肿瘤免疫治疗领域，出现了利用双靶向抗体(Bispecific antibody,BsAb)介导T细胞杀灭癌细胞的新疗法。人体免疫系统中，细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte，CTL)扮演着重要的角色，具有T细胞受体(T cell receptor，TCR)，能特异性识别并结合表达目标抗原的细胞，并分泌穿孔素和颗粒酶杀灭靶细胞。肿瘤细胞由于缺少免疫粘附分子和共刺激分子等原因,使得机体免疫无法有效识别和活化，从而使得CTL无法清除癌细胞。BsAb能够同时与T细胞和肿瘤细胞特异性抗原结合，可在T细胞与肿瘤细胞之间形成免疫突触(immune synapse)，发挥T细胞受体(TCR)一样的功能，从而激活T细胞免疫机制，介导T细胞杀死靶细胞。

目前报道了几种EGFRvIII抗体，能特异性识别并结合EGFRvIII抗原及EGFRvIII阳性肿瘤细胞，这几种抗体包括：

(1)小鼠来源的单克隆抗体mAb 806(anti-EGFRvIII)，最早的anti-EGFRvIII抗体，通过给小鼠免疫表达EGFRvIII的NR6小鼠成纤维细胞而来。该抗体只能结合EGFRvIII抗原和EGFRvIII表达阳性的细胞，不能结合T细胞，无法介导T细胞杀伤；只能通过ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)或CDC(complement-dependent cytotoxicity)靶向杀灭EGFRvIII抗原阳性肿瘤细胞，用来人类治疗时还会存在宿主抗移植物反应，主要相关论文(Cancer Res.2001Jul 15；61(14):5349-54.Cancer Res.2001Jul15；61(14):5355-61.)。

(2)重组单克隆抗体recombinant antibody anti-EGFRvIII(Rab DMvIII),由Stanford大学研发，将抗体可变区用氨基酸链连接起来，然后与人的IgG的Fc段连接，并通过Knobs-into-holes改造，增加亲和力的同时提高人源化，消除了大部分鼠源序列，该抗体能结合EGFRvIII抗原和EGFRvIII表达阳性的细胞，但还是不能结合T细胞，无法介导T细胞杀伤；只能通过ADCC或CDC能靶向杀灭EGFRvIII抗原阳性肿瘤细胞， 临床疗效尚不明确，主要相关论文(BMC Biotechnol.2010Oct 7；10:72.)。

(3)小鼠来源的单克隆抗体CH12(anti-EGFRvIII)，中国国内研发的抗体，由Shanghai Cancer Inst,Shanghai Yijie Biotech公司研发，目前正在临床II期实验，只能结合EGFRvIII抗原和EGFRvIII表达阳性的细胞，不能结合T细胞，无法介导T细胞杀伤；只能通过ADCC或CDC靶向杀灭EGFRvIII抗原阳性肿瘤细胞。专利来源US8506963B2，主要相关论文(Oncotarget.2015Nov 17；6(36):38840-53.FASEB J.2012Jan；26(1):73-80.J Biol Chem.2011Feb 18；286(7):5913-20.)。

目前市场上尚无审批通过的EGFRvIII×CD3双靶向性抗体。本发明旨在提供一个高效、低成本、抗EGFRvIII和CD3特异性双靶向抗体及其制备方法和应用。

发明内容