[发明专利]一种富集分离唾液酸化糖肽的新材料及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性富集唾液酸化糖肽的方法。本发明要求保护g‑C₃N₄在富集唾液酸化糖肽和或唾液酸化聚糖和或唾液酸化糖苷中的应用。本发明保护一种富集唾液酸化糖肽的方法，包括如下步骤：(1)将g‑C₃N₄分散液加入到唾液酸化糖蛋白的酶切产物中，振荡富集唾液酸化糖肽；(2)富集液离心后，向g‑C₃N₄沉淀中加入洗脱液，得到唾液酸化糖肽溶液。本发明提供的方法基于环境友好、制备简便、成本低廉的g‑C₃N₄材料，富集条件温和、特异性高，最大程度上保持唾液酸化糖链的结构信息。该方法能真实地反映蛋白质天然的糖基化状态，在复杂样本中唾液酸化糖肽的检测和相关肿瘤标志物的筛查方面具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种富集分离唾液酸化糖肽的新材料和新方法。基于石墨相氮化碳(g-C₃N₄)材料独特三嗪环结构中大量N原子可以与唾液酸化糖链O-H形成氢键的特性，以及共轭结构特有的π相互作用吸附性能，在不破坏糖蛋白结构的前提下，实现唾液酸化糖肽、唾液酸化聚糖或唾液酸化糖苷的高效、低成本、特异性富集分离。为复杂样本中唾液酸化糖肽的检测和相关肿瘤标志物的筛查等提供了新思路和新方法。

背景技术

在生物体的生命活动中，唾液酸化糖链起特异性识别和介导的作用，对蛋白质的结构和功能有着极为重要影响。研究发现，人体内唾液酸的表达与许多病理状态有极为密切的联系，如自身免疫疾病、心血管疾病、肿瘤发生进展、细菌病毒感染、神经性疾病以及内分泌异常等等。唾液酸化糖蛋白是一类重要的蛋白翻译后修饰，可作为疾病标志物，对于深入研究疾病的发生机制和诊断治疗等有非常重要的意义。复杂的生物样品体系中唾液酸的丰度动态变化范围很大，相当一部分的低丰度唾液酸化糖肽、唾液酸化聚糖或唾液酸化糖苷很容易受到其他成分非的抑制。因此唾液酸的研究所面临的首要问题是对其有效的分离富集。

目前已有多种富集唾液酸化糖肽的方法，主要包括凝集素法、化学反应法和亲水材料色谱法等等。其中凝集素亲和法是目前唾液酸化糖蛋白富集研究中应用最广泛的方法。凝集素可以特异性富集唾液酸，但是成本较高，结合力弱，也不利于进行高通量肿瘤标志物的筛查等工作。常用的化学反应富集法包括硼酸化学反应法和酰肼化学反应法等，在高通量的糖基化位点尤其是N-型糖基化位点鉴定中，获得了很好的应用。然而此类方法化学反应步骤较多，条件不易控制，并且化学反应过程破坏了糖链的结构，不利于进一步进行糖链类型和结构的鉴定分析。而两性离子型亲水性色谱法以及强离子交换色谱法能够非选择性的富集各种类型的糖肽，但特异性较差，富集效率有待提高，且容易造成唾液酸信息丢失。

发明内容

本发明的目的是提供一种富集唾液酸化糖肽的新材料及其新富集方法。

本发明要求保护氮化碳材料在富集唾液酸化糖肽中的应用。

本发明还保护一种富集唾液酸化糖肽的方法，包括如下步骤：

(1)将g-C₃N₄分散液加入到唾液酸化糖蛋白的酶切产物中，振荡富集唾液酸化糖肽；

(2)富集液离心后，向富集唾液酸化糖肽的g-C₃N₄沉淀中加入洗脱液，得到唾液酸化糖肽溶液。

上述的富集方法中，酶切产物是将唾液酸化糖蛋白进行酶切得到的产物。所述酶切具体为胰蛋白酶酶切。