[发明专利]一种富马酸替诺福韦酯中杂质9‑丙烯基腺嘌呤的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种富马酸替诺福韦酯中杂质9-丙烯基腺嘌呤的测定方法。

背景技术

富马酸替诺福韦酯是新型核苷酸类逆转录酶抑制剂替诺福韦的前药，临床用于治疗艾滋病和慢性乙型肝炎。

富马酸替诺福韦酯在合成和贮存过程中会引入多种杂质，其中9-丙烯基腺嘌呤是由起始原料带入，并在贮存过程中也会生成的杂质，具有严重的遗传毒性作用，WHO将其限度规定为不超过5ng·mL^-1。9-丙烯基腺嘌呤的相对分子质量为175，结构式如下：

目前已有文献用外标法对富马酸替诺福韦酯中9-丙烯基腺嘌呤的含量进行了定量分析和质量控制，但未见有用内标法的报道。鉴于9-丙烯基腺嘌呤的限度规定较严格，外标法的准确性又受进样重复性和试验条件稳定性的影响较大，因此有必要开发一种不受仪器操作影响、准确度高的内标法来对9-丙烯基腺嘌呤的含量进行质量控制。

本发明开发的方法能对富马酸替诺福韦酯的生产和使用进行更好的质量控制，确保药品质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种富马酸替诺福韦酯中杂质9-丙烯基腺嘌呤的测定方法。

本发明的富马酸替诺福韦酯中杂质9-丙烯基腺嘌呤的测定方法是采用超高效液相色谱法-电喷雾离子化串联质谱法即UPLC-MS/MS法来检测富马酸替诺福韦酯中杂质9-丙烯基腺嘌呤浓度的，本方法采用内标法，盐酸左西替利嗪作为9-丙烯基腺嘌呤测定的内标；液 相条件中流动相由甲醇水组成，梯度洗脱。

本发明上述所述的富马酸替诺福韦酯中杂质9-丙烯基腺嘌呤的测定方法，其具体包括如下步骤：

(1)含内标稀释液的配制：精密称取10mg盐酸左西替利嗪标准品，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，配成盐酸左西替利嗪浓度为0.1mg·mL-1的稀释液母液，取1mL稀释液母液，置另一100mL容量瓶中，甲醇定容混匀，即配成含内标浓度为1μg·mL-1的稀释液工作液。

(2)9-丙烯基腺嘌呤采用超高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的高通量测定方法：取上述待测液6μL进行LC-MS分析，其中液相条系统条件为流动相：A相为纯水，B相为甲醇，梯度洗脱；0-1min 60％B，1-1.5min 60％～90％B，1.5～2.2min 90％～60％B，2.2-4.0min 60％B；色谱柱为Thermo Hypersil GOLD 100*2.1；流速：0.1-0.5mL·min^-1；柱温：20-40℃；样品盘温度：4-25℃；进样量：1-7.5μL。进一步优选为流速：0.2mL·min^-1；柱温：35℃；样品盘温度：20℃；进样量：6μL；质谱系统条件为：离子源：H-ESI；喷射电压：2500-5000V；鞘气：20-50Arb；辅助气：5-25Arb；尾吹气：0-2Arb；离子传输毛细管温度：250-400℃；气化温度：40-300℃。进一步优选为喷射电压：3500v；鞘气：40Arb；辅助气：10Arb；尾吹气：0Arb；离子传输毛细管温度：325℃；气化温度：150℃。

(3)9-丙烯基腺嘌呤标准曲线的确定：精密称取9-丙烯基腺嘌呤标准品10mg，置10mL容量瓶中，用含内标稀释液工作液溶解并定容，配成1mg·mL-1浓度的标准品储备液。用含内标稀释液工作液进一步成比例稀释，配制系列浓度为10.0，5.00，2.00，1.00，0.500，0.200，0.100ng·mL-1的标准曲线溶液样品，对各浓度进行分析，记录色谱图；以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权(W＝1/x²)最小二乘法进行回归分析，确定9-丙烯基腺嘌呤标准曲线及其定量限；所述的内标物为盐酸左西替利嗪。

(4)富马酸替诺福韦酯样品中9-丙烯基腺嘌呤浓度的测定：精密称取10mg富马酸替诺福韦酯粉末，置10mL容量瓶中，用含内标稀释液溶解并定容。按照步骤(2)中的超高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的高通量测定方法以及步骤(3)中所获得的9-丙烯基腺嘌呤标准曲线计算，确定不同批次样品中9-丙烯基腺嘌呤的浓度。

本发明的主要目的为通过选择优化测定过程的测定条件及参数，提供一种快速、稳定、准确的内标测定法：