[发明专利]一种羚羊角的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种羚羊角的检测方法。

背景技术

羚羊角为牛科动物赛加羚羊Saiga tatarica Linnaeus的角，主要产地为新疆天山北伊犁，其具有平肝熄风、清肝明目、散血解毒之功效，但是现行检测羚羊角的方法存在缺陷：对羚羊角的性状进行观察的方法，该方法准确度非常低。

发明内容

本发明为了克服现有羚羊角检测方法的缺点，提供了一种准确度高、可行性好、重现性好的羚羊角的检测方法。

本发明提供一种羚羊角的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)进行羚羊角检测的步骤，其中，以羚羊角对照药材为对照品，以m/z 860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z 860.8±0.5(双电荷)→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对。

优选地，上述检测方法中，所述高效液相色谱的条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，流动相A选自甲酸、乙酸、甲酸水溶液或乙酸水溶液中的至少一种，优选自0.1％(v/v)甲酸的水溶液或0.1％(v/v)乙酸的水溶液；流动相B选自乙腈、甲醇或甲酸的乙腈溶液中的至少一种，优选为0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，进行梯度洗脱；

更优选地，上述检测方法中，所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液为流动相A，以0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱：0～25分钟，A 95％→80％，B 5％→20％；25～40分钟，A80％→50％，B 20％→50％；40～41分钟，A50％→1％，B 50％→99％；41～45分钟，A1％→1％，B 99％→99％。

优选地，上述检测方法中，所述质谱采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测。

优选地，上述检测方法包括将所述羚羊角进行酶解的步骤。

更优选地，上述酶解包括向羚羊角中依次加入尿素，DTT，IAA和酶的步骤。

更进一步优选地，上述酶解包括如下步骤：向羚羊角中加入尿素，再加DTT，60±5℃加热30±5min，冷却，加入IAA，黑暗中放置30±5min，加碱稀释至10ml，加酶于37℃反应12h以上。

优选地，上述检测方法中，所述酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的至少一种，更优选胰蛋白酶。

优选地，上述检测方法中，所述碱为碳酸氢铵(NH₄HCO₃)。

优选地，上述检测方法包括如下步骤：

(1)将羚羊角按所述的酶解的步骤制得供试品溶液；

(2)取羚羊角对照药材按所述的酶解的步骤制得对照品溶液；

(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱-质谱联用仪测定，以m/z 860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z 860.8±0.5(双电荷)→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对。

更优选地，上述检测方法包括如下步骤：

(1)将羚羊角粉碎，取羚羊角粉末10mg，加8M尿素1ml，加入1M的DTT 10μl，60℃加热30min，冷却，加入1M的IAA 30μl，黑暗静置30min，加入浓度为0.01g/ml的NH₄HCO₃溶液稀释至10ml，加入由浓度为0.01g/ml的NH₄HCO₃溶液配制得到的浓度为1μg/μl的胰蛋白酶溶液20μl，37℃反应12h以上，得酶解溶液，取适量酶解溶液过0.22μm的滤膜，续滤液置进样瓶中，制得供试品溶液；

(2)取羚羊角对照药材，按步骤(1)的方法制得对照品溶液；