[发明专利]氨基酸与肉碱串联质谱衍生化检测法

说明书

技术领域

本发明涉及质谱检测领域，具体地涉及氨基酸与肉碱串联质谱衍生化检测法。

背景技术

遗传性代谢病又称先天性代谢缺陷(inborn error of metabolism，IEM)，是由基因突变导致遗传性生化代谢功能缺陷所造成的一类遗传病，涉及氨基酸、有机酸、脂肪酸、碳水化合物、溶酶体、类固醇等多种物质代谢的异常。其单一病种患病率较低，但由于种类繁多，总体发病率较高。该类疾病发病后常呈进行性加重，如未能早期识别诊断、干预、治疗，常导致早期夭折或终身残疾，且以神经、智力残疾为最多，会严重影响人口素质，造成家庭和社会的沉重负担。因此开展IEM的早期筛查，实现早期诊断，成为IEM防治的关键，对避免和减少残疾儿童的发生，提高人口素质，推动国民经济发展有着重要的意义。目前，IEM的诊断方法主要有枯草杆菌抑制试验、酶活性测定、气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)、单基因分析等。这些诊断方法用于IEM筛查具有局限性：(1)普遍通量低，一般一次只能检测一种至几十种，不能满足IEM可检出病种的逐年增多，并且需要对遗传性代谢病有准确的预判；(2)不同IEM的检测方法各异，且样本多样，如一些疾病检测蛋白水平、而另一些疾病则检测基因水平，有些疾病需要尿液样本、而另一些则需要血液样本。因此不太适合开展大规模的遗传性代谢病的筛查，亟需要一种能高通量检测IEM多种疾病的技术。LC-MS/MS技术的发展使得这类疾病在发病前进行干预成为可能。它通过同位素内标对新生儿滤纸干血片样本中的氨基酸、酰基肉碱的浓度进行分析，能在2～3min内对1个标本进行几十种代谢产物分析，通过对这些产物的分析，可以对40种左右遗传性代谢病(包括氨基酸代谢紊乱、有机酸代谢紊乱和脂肪酸代谢紊乱性疾病)进行筛查和诊断，大大提高了检测效率。

然而，现有技术中虽然有一些针对氨基酸、肉碱的检测方法，但是往往存在较大的系统误差(如转移过程中移液器移液偏差造成体积不准确)、检测灵敏度较低，并且难以同时定量检测氨基酸、肉碱。

因此，本领域迫切需要开发新的检测灵敏度较高并且能够同时定量检测氨基酸、肉碱的技术。

发明内容

本发明的目的就是提供一种检测灵敏度较高并且能够同时定量检测多种氨基酸和酰基肉碱的技术。

在本发明的第一方面，提供了一种串联质谱检测试剂盒，其特征在于，包括：

(1)同位素标准品，所述的同位素标准品包括(i)氨基酸同位素标准品和(ii)肉碱标准品；

(2)质控品，所述的质控品；所述的同位素标准品包括(i)氨基酸同位素标准品和(ii)肉碱标准品；

(3)提取液；

(4)转化液；

(5)复溶液；

在另一优选例中，所述的串联质谱检测试剂盒包括：

(1)同位素标准品，所述的同位素标准品包括(i)氨基酸同位素标准品和(ii)肉碱标准品；

(2)质控品，所述的质控品；所述的同位素标准品包括(i)氨基酸同位素标准品和(ii)肉碱标准品；

(3)提取液，所述的稀释液为乙腈；

(4)转化液，所述的转化液为PTAD(4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮)；

(5)复溶液，所述的复溶液为甲醇；

在另一优选例中，所述试剂盒还包括选自下组的部件：

(6)96孔蛋白过滤板，

(7)96孔板。

在另一优选例中，所述的96孔板为深孔板。

在另一优选例中，所述的氨基酸同位素标准品包括选自下组的n种同位素标准品：d10-亮氨酸、¹⁵N4-精氨酸、d3-丙氨酸、d8-缬氨酸、d3-蛋氨酸、d8-苯基丙氨酸、d7-酪氨酸、d7-鸟氨酸、d7-瓜氨酸、d3-脯氨酸，¹³C2,¹⁵N-甘氨酸，

其中，n为1-11的正整数。

在另一优选例中，n为2、3、4、5、6、7、8、9、10、或11。

在另一优选例中，n为8、9、10、或11。

在另一优选例中，所述的肉碱同位素标准品包括选自下组的m种同位素标准品：d3-游离肉碱、d3-乙酰基肉碱、d3-丙酰基肉碱、d3-丁酰基肉碱、d3-异戊酰基肉碱、d3-己酰肉碱、d3-辛酰基肉碱、d3-癸酰基肉碱、d3-月桂酰肉碱、d3-肉豆蔻酰肉碱、d3-棕榈酰肉碱、d3-十八酰基肉碱；

其中，m为1-12的正整数。