[发明专利]一种检测母乳中低聚糖的方法

权利要求书

1.一种检测母乳中低聚糖的方法，其特征在于：对母乳样品进行前处理，采用液质法对前处理后的母乳中的低聚糖进行定性和定量分析，所述前处理具体为：在2-8℃，2000-6000g条件下离心所述母乳样品5-30min，除去上层物质，取下层液体并加入相当于下层液体体积1.5-2.5倍的乙醇水溶液，于﹣70℃~﹣90℃冷冻5-15min后，于10000-15000rpm离心10-50min，取上清液，即得；

其中，液相采用Hypercarb多孔石墨碳色谱柱，以甲酸-乙腈-水为流动相A相；甲酸-乙腈-水为流动相 B相，按0min 100%A，10-30min 84%A，20-40min 100%B，30-50min 100A%的条件进行梯度洗脱；所述流动相A相中，甲酸的体积百分数为0.05%-0.15%，乙腈的体积百分数为2%-4%；所述流动相 B相中，甲酸的体积百分数为0.05-0.15%，乙腈的体积百分数为85%-95%；

所述定性分析的低聚糖包括2’-岩藻乳糖，6’-唾液乳糖，3’-岩藻乳糖，乳糖二岩藻四糖，唾液酰-N-乙酰氨基乳糖，乳糖-N-四糖/乳糖-N-新四糖，乳糖-N-岩藻戊糖II，唾液乳糖-N-新四糖，乳糖-N-二岩藻己糖I，乳糖-N-己糖，岩藻-唾液乳糖-N-新四糖，岩藻糖基-对-乳-N-己糖 IV，唾液乳糖-N-己糖，二岩藻基-对-乳-N-己糖，岩藻乳糖-N-八糖，二岩藻-唾液乳糖基-N-新己糖，岩藻-唾液乳糖基-N-八糖，三岩藻糖-异乳糖基-N-八糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述乙醇水溶液为体积分数60-70%的乙醇水溶液。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，

所述流动相A相为0.1%甲酸-3%乙腈-水；流动相B相为0.1%甲酸-90%乙腈-水。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：质谱采用Q Exactive检测器。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，质谱包括如下参数：采用可加热电喷雾离子源，正离子全扫模式。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，质谱还包括如下参数：

S型透镜射频50-70V；和/或，毛细管温度300-350℃；和/或，喷雾电压3-4kV；和/或，加热温度300-400℃；和/或，扫描范围150-2000m/z。

7.根据权利要求4或5或6所述的方法，其特征在于，所述定量分析包括如下步骤：

（1）制备待测样品溶液：取母乳样品，离心除去上层脂肪，取下层液体并加入醇类溶剂，于﹣70℃~﹣90℃冷冻5-15min后，离心，取上清液，即得；

（2）制备标准品溶液：将低聚糖标准品溶于水中，配制3-8个不同浓度梯度的标准品溶液；

（3）绘制标准工作曲线：采用液质法对步骤（2）的标准品溶液进行检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线；

（4）定量分析：采用与步骤（3）相同的液质条件对待测样品溶液进行检测，根据标准工作曲线，计算低聚糖的含量。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：2’-岩藻乳糖标准工作曲线的线性范围为0.5-20mg/mL，6’-唾液乳糖标准工作曲线的线性范围为0.5-50mg/mL，3’-岩藻乳糖标准工作曲线的线性范围为0.5-20mg/mL。