[发明专利]基于微生物毒性快速筛检茶叶农药残留的方法

说明书

本发明建立一种应用丁酸梭菌WZMC1016作为工作菌株筛检茶叶中有机磷农药残留的微生物方法。本发明还提供了一种筛检茶叶中有机磷农药残留的微生物法，根据筛检培养基上抑菌圈的大小判定待测茶叶中有机磷农药残留量是否超标。本发明提供筛检茶叶中有机磷农药残留的方法具有操作简便、费用低廉、灵敏度高、适合样本筛检的特点，不仅可以作为微生物法的测试菌，而且还可以反应出农药残留的生物学效应，且具有灵敏、快速、培养时间短、减少来自微生物污染的干扰等优点。

技术领域

本发明涉及茶叶农药残留检测，具体涉及茶叶中有机磷农药残留的生物安全评估及应用。

背景技术

茶叶中农药残留是公众非常关注的食品安全问题，我国现行农残检测一般采用仪器分析法，主要采用气相色谱、液相色谱及气质、液质联用的大型仪器进行检测，仪器价格昂贵且操作人员必须具备相当的专业技能，检测周期长，不利于在一线监管部门进行普及。仪器分析法只能对单种农药分别进行检测，不能全面反应食品的生物安全性，而且检测时间长，设备昂贵，操作复杂，不适合大样本快速筛检，也无法对农药进行生物危害性评估。

目前，在茶叶中农残的快速检测方面主要集中在有机磷类农药，应用较广泛的主要是酶抑制法，该法主要利用有机磷类农药对乙酰胆碱酯酶有抑制作用，采用酶促反应对该类农药进行快速检测，但酶的活性易受pH及其他条件如抑制剂干扰，而产生假阳性，方法的可靠性差。

农药残留筛选方法在确认样品中是否存在农药残留问题是非常有效的；其应用目的是保证待检食品中不含有超过最高残留限量的农药残留，筛选方法缩小检测的范围。

为了解决农药残留检测所存在的问题，建立一种稳定性好、抗干扰性强、操作简便、检测时间短、易学易用、无需专业技术知识的检测方法变得非常重要。人们利用生物测定法方法对农药残留筛查已经进行了许多探索：上世纪60年代后期，台湾农业试验所采用生物测定方法进行农药残留检验，其原理是释放高敏感性的家蝇于菜汁中，4～5h后家蝇死亡率在10％以下即为合格，该方过程简单，无须复杂仪器检测，缺点是检测时间较长，只对部分杀虫剂有反应，准确性较低。微生物法是一个很好的筛查方法，具有如下优点：微生物结构简单，生长速度快，反应灵敏，费用低廉，占用空间相对较小，能较快的作出响应。因此，微生物检测技术具有快速、简便、灵敏的特点，可以满足大样品筛检的要求。

有机磷农药为杀虫剂、杀螨剂，其化学性质不太稳定，多数易氧化、水解、异构化。由于温度、pH值、水分等因素可以加速这些过程的进行。有机磷农药引起中毒的作用机理是抑制了体内的胆碱酯酶，使其失去了分解乙酰胆碱的能力，从而造成体内乙酰胆碱的积累，刺激了中枢神经系统，使各项功能失调，引起生理紊乱，因此对食品中有机磷农药残留的检测是十分必要。农药残留前处理是目前茶产品中农药检测工作的瓶颈和国内外研究的薄弱环节。

目前，测定有机磷农药的方法主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、化学发光法、酶抑制法、毛细管电泳技术(CE)等。用上述方法检测存在仪器设备复杂、样本前处理和测定操作繁琐的缺陷，不适合大量样本筛检，而且费用高昂，使其推广使用受到限制。微生物法突出优点是简便而经济，不需要复杂的仪器设备，在一般的实验条件下就可以进行，可以对大量样本进行快速初筛。但是，工作菌株对待测物质的敏感性和特异性高低是影响微生物法准确度和精密度的最关键问题。迄今为止，尚无筛选出有机磷农药敏感性高、特异性高的丁酸梭菌工作菌株及其在茶叶中有机磷农药残留筛检应用的相关报道。

发明内容

本发明的目的是建立一种应用丁酸梭菌WZMC1016作为工作菌株筛检茶叶中有机磷农药残留的微生物方法。