[发明专利]一种南极磷虾中吡咯并[1,2‑a]吡嗪‑1,4‑二酮,六氢‑3‑(2‑甲基丙基)的提取纯化及检测方法

权利要求书

1.一种南极磷虾中六氢-3-(2-甲基丙基)-吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮的提取纯化方法，其特征在于，所述提取纯化步骤如下：

（1）向南极磷虾中加入甲醇进行回流提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得甲醇膏；

（2）向步骤（1）的甲醇膏中加入乙醚浸提，过滤得乙醚液；乙醚液蒸发后得乙醚浸膏；

（3）步骤（2）的乙醚浸膏加入适量乙醚溶解后，得乙醚浸膏液，再向其中加入硫酸水溶液搅拌萃取，萃取得酸水层；

（4）向步骤（3）所得酸水层中加入氯仿进行萃取，静置分液得氯仿层A；

（5）向步骤（4）所得氯仿层A中加入氢氧化钠水溶液萃取，静置分液得碱水层和氯仿层B；

（6）将步骤（5）所得碱水层中加入适量NH₄Cl，调节pH至7-8，再加入等体积氯仿进行搅拌萃取，静置分液得氯仿层C；

（7）氯仿层C蒸发浓缩得六氢-3-(2-甲基丙基)-吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮样品。

2.如权利要求1中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤（1）中，南极磷虾在加入甲醇前先经过冷冻干燥处理；南极磷虾与甲醇加入量的比为1g: (6-10)mL，提取温度为70~85℃；甲醇回流提取的次数为7-9次，每次提取的时间为1-2h。

3.如权利要求2中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述提取温度为80℃；所述每次提取时间为1h。

4.如权利要求1中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤（2）中，甲醇膏与乙醚加入量的比为1g: (4-6)mL，加入乙醚浸提的次数为4-6次，每次提取的时间为0.5-1h。

5.如权利要求4中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，每次提取时间为1h。

6.如权利要求1中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤（3）中，乙醚浸膏与乙醚加入量的比为1g:10mL；

所述乙醚浸膏液与硫酸水溶液加入量的体积比为1: (10-30)；所述硫酸水溶液的体积分数为1~3%。

7.如权利要求6所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述硫酸水溶液的体积分数为2%。

8.如权利要求1中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤（4）中，酸水层与氯仿体积比为1:1；所述氯仿与酸水层搅拌萃取次数为3-4次，每次搅拌萃取时间为0.5~1.5h。

9.如权利要求8中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，每次搅拌萃取时间为1h。

10.如权利要求1中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤（5）中，氯仿层A和氢氧化钠水溶液的体积比为1~2：1；所述氯仿层A与所述氢氧化钠水溶液搅拌萃取次数为6-7次，每次搅拌时间为0.5~1.5h。

11.如权利要求10中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述氯仿层A和氢氧化钠水溶液的体积比为1：1；每次搅拌时间为1h。

12.如权利要求1中所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤（6）中，加入氯仿后进行搅拌萃取的次数为3-4次，每次搅拌萃取时间为1h。

13.如权利要求1-12任一项所述提取纯化方法，其特征在于，所述纯化方法还包括对制备得到的六氢-3-(2-甲基丙基)-吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮的检测方法，所述检测方法采用气相色谱-质谱法分析检测，检测条件为：DB-1色谱柱，30m×0.25mm×0.25μL；载气：氦气；流速：1mL/min，溶剂延迟2.06min；升温程序：初始温度为50℃，以2℃/min升温到60℃，再以30℃/min升到250℃，保持8min；离子化方式：EI，70 eV；离子源温度：250℃；载气：氦气；柱流速：1.0 mL/min。