[发明专利]一种具有手性的空壳‑卫星状结构纳米光敏剂的制备方法

权利要求书

1.一种具有手性的空壳-卫星状结构纳米光敏剂的制备方法，其特征在于包括金银纳米粒子的合成，银核-金卫星状结构的组装，空壳-卫星状结构的制备及修饰D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构的制备，修饰D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构纳米光敏剂产生单线态氧能力的测定；

步骤如下：

（1）15nm金纳米粒子的合成：用柠檬酸钠还原合成法合成；在洁净的250mL的锥形瓶中加195mL超纯水，加5mL质量浓度0.4%的氯金酸溶液，搅拌并加热至沸腾，7-8min 后加4.8mL质量浓度1%的柠檬酸三钠溶液，至溶液从无色变为酒红色后，停止加热，继续搅拌，直至冷却至室温，即得到粒径为15nm的金纳米粒子；

（2）18-20nm银纳米粒子的合成：取20mL超纯水与5mL质量浓度为1%的聚乙烯吡咯烷酮混合于锥形瓶中，再加0.6mL 0.1mol/L的硼氢化钠水溶液和0.6mL的质量分数为1%的柠檬酸三钠，并进行冰浴保护；然后，将5mL质量浓度为1%的聚乙烯吡咯烷酮水溶液和5mL质量浓度为0.17% 的硝酸银水溶液同时以30mL/h 的速度用注射泵加入到上述溶液中，边搅拌边加入，待加入结束后，放置于80℃水浴2h即得到黄色溶液，即18-20nm的银纳米粒子；

（3）银核-金卫星状结构的组装：

a、将步骤（1）制备所得的1mL的金纳米粒子溶液以10000rpm离心10min，除去上清，沉淀重悬于100μL pH=7.5、10mM的磷酸盐缓冲液中，得到金纳米粒子PB溶液，备用；

b、将步骤（2）制备所得1mL的银纳米粒子溶液以7500rpm离心15min，除去上清，沉淀重悬于200μL pH=7.5、10mM的Tris-HCl缓冲液中，得到银纳米粒子Tris-HCl溶液，备用；

c、取步骤a制备的金纳米粒子PB溶液100μL，向其中加入2μL、10μM的DNA1溶液混合均匀；取步骤b制备的200μL银纳米粒子Tris-HCl溶液，向其中加入2μL、100μM的DNA2溶液混合均匀，37℃摇晃反应12h，分别得到Au-DNA1复合体及Ag-DNA2复合体；

d、将步骤c所得Au-DNA1复合体以10000rpm离心10min，Ag-DNA2复合体以7500rpm离心15min，除去上清即多余的未偶联的DNA，然后将两者沉淀混合于100μL pH7.5 10mM的Tris-HCl中，摇晃使之充分杂交，反应12h，即得到银核-金卫星状结构组装体；

（4）空壳-卫星状结构的制备：在步骤（3）中制得的100μL银核-金卫星状结构组装体溶液中，加入1μL、10mM的HAuCl₄溶液，充分混合，使银与HAuCl₄发生Galvanic反应，充分震荡5s，使之成为空壳-卫星状结构纳米组装体；8000rpm离心15min，重悬于100μL pH=9 10mM的Tris-HCl溶液中，即得到空壳-卫星状结构纳米组装体；

（5）修饰有D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构的制备：在100μL步骤（4）制备的重悬于pH为9的Tris-HCl溶液中的空壳-卫星状结构纳米组装体中，加入10μL 300μM的D-半胱氨酸，充分混合震荡15min，之后7500rpm离心15min，即得到手性可调节的空壳-卫星状结构纳米组装体；通过圆二色光谱仪测得其CD值，并通过透射电镜表征其空壳-卫星状结构；

（6）修饰D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构纳米光敏剂产生单线态氧能力的测定：将步骤（5）中得到的材料离心并重悬于同样体积的PBS溶液中，与单线态氧荧光探针混合，并置于532nm右圆偏振光下光照20min，之后用荧光光谱仪检测其在504nm激发下的发射波谱。

2.根据权利要求1所述具有手性的空壳-卫星状结构纳米光敏剂的制备方法，其特征在于：所述DNA序列为DNA1：5’-AAAAAGCAGT TGATCCTTTG GAT-3’； DNA2：5’-AAAAAATCCA AAGGATCAAC TGC-3’。