[发明专利]用于第三代单分子测序的PCR产物测序文库构建方法在审
| 申请号： | 201610584446.2 | 申请日： | 2016-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN107641838A | 公开（公告）日： | 2018-01-30 |
| 发明（设计）人： | 钟宏彬;陈俊清;安莹;陈文波;刘娜 | 申请（专利权）人： | 深圳华大基因股份有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司44281 | 代理人： | 孙银行,彭家恩 |
| 地址： | 518083 广东省深圳市盐田*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 第三代 分子 pcr 产物 序文 构建 方法 | ||
1.一种用于第三代单分子测序的PCR产物测序文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：将PCR产物进行末端修复和加A反应之后，与接头序列连接，其中所述接头序列是单一序列，从5’端的第一个碱基开始有一段序列与从3’端的第二个碱基开始的一段对应序列互相配对，且3’端的第一个碱基是T碱基，并且所述接头序列中间部分有一段序列不能互相配对，使得所述接头序列自配对后形成具有突出的3’端T碱基、配对双链序列和不配对的环状结构的形式；所述接头序列连接之后，进行外切酶消化和纯化，得到所述PCR产物测序文库。
2.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述第三代单分子测序是Pacbio测序。
3. 根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述接头序列具有SEQ ID NO：1所示的序列。
4. 根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述PCR产物选自16S rDNA或转录组DNA。
5.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述PCR产物的长度大于5Kbp。
6.根据权利要求5所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述PCR产物的长度是5-20Kbp。
7.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述外切酶是ExoIII和ExoVII外切酶。
8.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述纯化采用磁珠纯化。
9.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述方法还包括检测文库片段大小的步骤。
10.根据权利要求9所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述文库片段为单一峰，无杂峰；且所述文库片段大小相对于所述PCR产物的片段大小提高150-250bp。
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