[发明专利]体外高效制备非人灵长类动物巨核细胞及血小板的体系及其应用

权利要求书

1.一种制备非人灵长类动物巨核细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1) 利用造血干细胞扩增培养基扩增非人灵长类动物造血干/祖细胞；

(2) 将步骤(1)扩增后的细胞转移到巨核细胞诱导分化培养基中培养，获得非人灵长类动物巨核细胞；

其中，所述的造血干细胞扩增培养基包括：干细胞基础培养基以及如下组分：

干细胞因子：100-500 ng/mL；

Flt3-配体：100-500 ng/mL；

促血小板生成素：5-200 ng/mL；

白介素3：5-50 ng/mL；和

白介素6：5-50 ng/mL；

其中，所述的巨核细胞诱导分化培养基包括：干细胞基础培养基以及如下组分：

干细胞因子：20-200 ng/mL；

促血小板生成素：50-300 ng/mL；

白介素3：5-50 ng/mL；

白介素6：5-50 ng/mL；

粒细胞巨噬细胞刺激因子：5-50ng/ml；和

低密度脂蛋白：10-60 ug/ml。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的干细胞基础培养基选自：StemSpan培养基或者Modified IMDM培养基。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)包括：非人灵长类动物造血干/祖细胞加入到所述的造血干细胞扩增培养基中，使得细胞浓度为0.5×10⁴-10×10⁵个细胞/mL；培养2-4天后根据细胞数目增加量添加所述的造血干细胞扩增培养基使得细胞浓度为0.5×10⁴-10×10⁵个细胞/mL；步骤(1)进行5-7天。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)包括：步骤(1)进行5-7天后，将获得的细胞转移到所述的巨核细胞诱导分化培养基中，细胞密度为1.0×10⁵-10×10⁵个细胞/mL，继续培养2-4天后根据细胞数目增加量添加所述的巨核细胞诱导分化培养基使得细胞浓度为1.0×10⁵-10×10⁵个细胞/mL，继续培养3-5天后收获细胞。

5.一种用于制备非人灵长类动物巨核细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：用于扩增非人灵长类动物造血干/祖细胞的造血干细胞扩增培养基和用于诱导分化非人灵长类动物巨核细胞的培养基；

其中，所述用于扩增非人灵长类动物造血干/祖细胞的造血干细胞扩增培养基包括干细胞基础培养基以及如下组分：干细胞因子：100-500 ng/mL；Flt3-配体：100-500 ng/mL；促血小板生成素：5-200 ng/mL；白介素3：5-50 ng/mL和白介素6：5-50 ng/mL；

所述用于诱导分化非人灵长类动物巨核细胞的培养基包括干细胞基础培养基以及如下组分：干细胞因子：20-200 ng/mL；促血小板生成素：50-300 ng/mL；白介素3：5-50 ng/mL；白介素6：5-50 ng/mL；粒细胞巨噬细胞刺激因子：5-50ng/ml；和低密度脂蛋白：10-60ug/ml。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述用于扩增非人灵长类动物造血干/祖细胞的造血干细胞扩增培养基包括如下组分：

干细胞因子：100-300 ng/mL；

Flt3-配体：100-300 ng/mL；

促血小板生成素：10-100 ng/mL；

白介素3：10-40 ng/mL；和

白介素6：10-40 ng/mL。