[发明专利]一种孤独症血清糖蛋白标记物的用途

说明书

技术领域

本发明属于孤独症血清标记物检测领域，涉及一种孤独症血清糖蛋白标记物的应用，具体涉及糖蛋白Apolipoprotein D(APOD)作为孤独症检测标记物的应用。

背景技术

孤独症(自闭症)谱系障碍(Autism Spectrum Disorders,ASD)是一种先天脑部功能受损而引起的广泛性发展障碍，以社会交往障碍、言语和非言语交流缺陷、兴趣狭窄和行为刻板等为主要临床特征。该障碍最早在1943年被报道，但将其归为“精神分裂症、儿童型”之中，直到1980年才将此障碍与儿童精神病分离开来，并提出了广泛发育障碍的概念和分类，孤独症是其亚型之一，确定了儿童孤独症的分类地位，由此儿童孤独症作为独立疾病也越来越受到关注与研究。

目前，儿童孤独症发病率为1/100，远远高于癌症(1/1500)、21三体综合征(1/800)、糖尿病(1/500)。全世界至少有6700万孤独症患者，我国孤独症患儿约有60至180万，而且每年以10％到17％的比例增长，并有上升趋势。因此，早期诊断儿童孤独症对于及早干预治疗，缓解儿童发育障碍，给患儿和家庭带来希望有非常现实的意义。

目前，孤独症诊断的主要依据是《孤独症诊断访谈(修订版)》和《孤独症诊断观察程序表》，以及必要的心理评估、躯体和神经系统检测，还有一些必要的辅助检测。但这种诊断方式有一定的缺陷性：首先，需要临床医师能够准确掌握客观的病史，充分了解患儿的精神心理发展情况，否则容易和其他精神疾病相混淆；其次，测验耗时长，从初诊到最终确诊需要一年时间；最后，问卷调研对于小于3岁的儿童，存在困难。因此，急需一种在上述病史基础上能够辅助诊断孤独症的客观指标。

血清蛋白标记物的检测目前在肿瘤疾病中已得到广泛应用，如肺癌、胃癌及肝癌等。而孤独症诊断的辅助检测目前只有脑电图及CT、MR，还未见血清蛋白标记物的报道。寻找具有诊断或联合诊断价值的血清标志物是当务之急，也是ASD早发现早治疗的关键。因此，提供在血清中能够特异高表达的基因或蛋白质具有重要的诊断和治疗意义，本领域迫切需要开发可用于检测或判断ASD的血清特异标志物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种孤独症血清糖蛋白标记物的应用。

该孤独症血清糖蛋白为凝集素MAL-II识别糖链Siaα2-3Gal/GalNAc酸化的Apolipoprotein D(APOD)。APOD在孤独症(ASD)患儿血清中表达较正常儿童(TD)血清中的表达上调1.9倍，高表达α2-3唾液酸化APOD可以灵敏和特异地区分ASD(AUC是0.88)和正常人群。

本发明是通过以下技术方案来实现：

本发明公开了糖蛋白Apolipoprotein D可以作为血清检测孤独症的诊断标记物的用途。

本发明公开了糖蛋白Apolipoprotein D在制备血清检测孤独症诊断试剂或诊断试剂盒中的用途。

所述糖蛋白Apolipoprotein D为载脂蛋白，在孤独症血清中高表达。

在糖蛋白Apolipoprotein D上具有能够被凝集素MAL-II识别的糖链Siaα2-3Gal/GalNAc。

能够通过凝集素/糖-抗体芯片对血清中的糖蛋白Apolipoprotein D表达进行检测。

糖蛋白Apolipoprotein D在孤独症患儿血清中表达较正常儿童血清中的表达上调1.9倍。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明公开了一种孤独症血清糖蛋白标记物的用途，通过凝集素芯片联合蛋白质谱正向和凝集素/糖-抗体芯片反向同时验证了在ASD血清中高表达的糖蛋白Apolipoprotein D(APOD)，此蛋白可以作为孤独症诊断的血清糖蛋白标记物。本发明填补了孤独症生化诊断的空白。

本发明通过制备凝集素芯片，将ASD血清与TD血清标记cy3后与凝集素芯片杂交，鉴定出在ASD中高表凝集素MAL-II；其次将血清样本点在芯片上，cy3标记的MAL-II与其杂交，反向验证ASD组的MAL-II修饰蛋白表达明显高于TD组；最后将MAL-II与磁珠偶联，偶联磁珠的MAL-II与血清样本结合，将与MAL-II连接糖链结合的蛋白洗脱、解离后，用蛋白质谱鉴定洗脱蛋白，鉴定出在ASD血清中高表达的糖蛋白是APOD。该糖蛋白可以作为ASD血清标记物在临床诊断中予以应用。

附图说明

图1a为50例ASD患儿凝集素芯片杂交图；

图1b为50例TD儿童凝集素芯片杂交图；