[发明专利]一种透明化试剂、生物组织透明化成像方法及其应用

权利要求书

1.一种透明化试剂，其特征在于：透明化试剂是山梨糖醇、尿素、甘油和去污剂溶于二甲基亚砜溶剂中形成的混合试剂；山梨糖醇、尿素、甘油和去污剂溶于二甲基亚砜的质量体积比分别是25％-35％、10％-30％、1％-5％、0％-5％。

2.权利要求1所述一种透明化试剂的应用，其特征在于：在离体生物组织透明化处理和离体生物组织成像中的应用。

3.一种生物组织透明化的成像方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

A)生物组织的固定和分离；

B)将生物组织浸泡在权利要求1所述的透明化试剂中，直到生物组织变得透明，透明化试剂采用权利要求1所述的透明化试剂；

C)对透明化的生物组织进行染色、制片和成像。

4.根据权利要求3所述的一种生物组织透明化的成像方法，其特征在于：所述步骤A中的生物组织为脑组织、胚胎、肾脏、脊柱、肝脏组织、肠道组织或者卵巢组织。

5.根据权利要求3所述的一种生物组织透明化的成像方法，其特征在于：所述步骤A中的生物组织来源于爬行类、鸟类和哺乳类动物生物体。

6.根据权利要求3所述的一种生物组织透明化的成像方法，其特征在于：所述步骤C中染色采用免疫荧光染色、免疫组织化学染色、化学染料染色和病毒感染表达荧光蛋白的方法。

7.根据权利要求3所述的一种生物组织透明化的成像方法，其特征在于：对于透明化自表达荧光蛋白的生物组织，不需要所述步骤C中生物组织染色步骤，而是直接进行制片和成像。

8.根据权利要求3所述的一种生物组织透明化的成像方法，其特征在于：所述步骤C中透明化生物组织的制片采用如下方法：先制备的回形模具，回形模具中部设有方形孔洞，外部为方形框架，厚度需与透明化的组织厚度相一致；然后将回形模具置于载玻片上，透明化的生物组织置于回形模具的方形孔洞中，在方形孔洞中加满透明化试剂；最后将盖玻片置于回形模具上，使方形孔洞密封。

9.根据权利要求3所述的一种生物组织透明化的成像方法，其特征在于：步骤C中所述的成像适用于多种光学显微镜，包括宽场荧光显微镜、激光片层扫描显微镜、激光共聚焦显微镜和双光子荧光显微镜。