[发明专利]一种纽莫康定B0的纯化方法

权利要求书

1.一种纽莫康定B0的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)过滤纽莫康定发酵液，取菌渣，并以醇类溶剂为萃取剂，对所述菌渣进行萃取；所得萃取液经膜过滤法过滤，所述膜过滤法具体为：先采用孔径为4500-5500道尔顿的超滤膜过滤所述萃取液，再采用孔径为900-980道尔顿的纳滤膜过滤，得过滤液备用；

(2)向所述过滤液中加入吸附剂，使纽莫康定B0富集于所述吸附剂上；

(3)对吸附有纽莫康定B0的吸附剂进行CO₂超临界萃取，将所得萃取液进行结晶处理，得到含纽莫康定B0的晶体；步骤(3)中，所述CO₂超临界萃取的操作为：以乙醇为夹带剂，先于35-40℃，19-20MPa条件下对吸附有纽莫康定B0的吸附剂进行一次萃取，弃去萃出物；然后向一次萃取后剩余的固形物中加入夹带剂，于45-50℃，29-30MPa条件下进行二次萃取，得含纽莫康定B0的乙醇萃取液；

(4)以HILIC模式反相键合硅胶为固定相，乙醇水溶液为流动相，对所述含纽莫康定B0的晶体进行柱层析分离，收集富含纽莫康定B0的流出液，即得。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中，所述醇类溶剂为70-80％的甲醇水溶液或60-70％的乙醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中，所述吸附剂选自硅藻土、活性氧化铝中的一种或两种。

4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于：所述吸附剂的加入量为所述过滤液中纽莫康定B0重量的5-6倍。

5.根据权利要求1或3所述的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中，加入吸附剂前，还包括除去所述过滤液中水的步骤，具体为：以甲醇或乙醇为置换剂，采用纳滤法置换过滤液中的水。

6.根据权利要求5所述的纯化方法，其特征在于：置换至所得溶液中甲醇或乙醇浓度达95％以上，纽莫康定B0含量为200-250g/L。

7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：一次萃取中，吸附剂与夹带剂的质量体积比为100g：100-150mL；二次萃取中，固形物与夹带剂的质量体积比为100g：180-220mL。

8.根据权利要求1或2或3所述的纯化方法，其特征在于：步骤(3)中，所述结晶以乙腈、丙酮、乙酸乙酯中的一种或多种为析晶剂；和/或，步骤(4)中所述流动相为40-50％的乙醇水溶液。

9.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：还包括对步骤(4)中所述的流出液进行后处理以获得固体纽莫康定B0的步骤，所述后处理具体为：纳滤所述流出液，对所得浓缩液进行冷冻干燥或结晶处理，即得。

10.根据权利要求9所述的纯化方法，其特征在于：所述纳滤采用孔径900-980道尔顿的纳滤膜；和/或，所述结晶以乙腈、丙酮、乙酸乙酯中的一种或多种为析晶剂。

11.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)固液分离纽莫康定发酵液，并向所得的发酵菌渣中加入70-80％的甲醇水溶液或60-70％的乙醇水溶液进行萃取，通过离心或压滤所得萃取液，并用滤芯孔径为0.4-0.5μm的液体过滤器过滤，得提取液；

(2)对所述提取液依次采用孔径4500-5500道尔顿的超滤膜和孔径900-980道尔顿的纳滤膜进行浓缩，得纳滤液；

(3)以甲醇或乙醇为置换剂，采用孔径为900-980道尔顿的纳滤膜对所述纳滤液进行浓缩，直至浓缩液中甲醇或乙醇浓度达95％以上且纽莫康定B0的浓度为200-250g/L，加入硅藻土和/或活性氧化铝，搅拌均匀后，于≤50℃浓缩至干，得到吸附有纽莫康定B0的固形物；

(4)按所述固形物与夹带剂的质量体积比为100g：100-150mL 的比例，向固形物中加入乙醇，于35-40℃，19-20MPa条件下进行一次萃取，弃去萃出物；然后按一次萃取剩余固形物与夹带剂的质量体积比为100g：1 80-220mL的比例，向一次萃取剩余的固形物中加入乙醇，于45-50℃，29-30MPa条件下进行二次萃取，得到含纽莫康定B0的乙醇萃取液；

(5)向所述含纽莫康定B0的乙醇萃取液中加入丙酮或乙腈进行结晶，得到含纽莫康定B0的晶体；

(6)以HILIC反相键合硅胶为固定相，40-50％的乙醇水溶液为流动相，对步骤(5)的晶体进行柱层析分离，收集含纽莫康定B0的流出液；

(7)采用孔径为900-980道尔顿的纳滤膜对所述流出液进行浓缩，向所得浓缩液中加入丙酮或乙腈析晶，经分离、干燥，即得纽莫康定B0纯品。