[发明专利]一株通过细胞低温传代和药物筛选致弱的猪伪狂犬病病毒基因缺失弱毒疫苗株及其应用

说明书

本发明公开了一株通过细胞低温传代和药物筛选致弱的猪伪狂犬病病毒基因缺失弱毒疫苗株及其应用。该弱毒疫苗株是在一株猪伪狂犬病病毒变异株(命名为HeN1株，其微生物保藏编号为CGMCC NO.6656)的基础上，首先通过在Vero细胞上低温传代筛选获得了在US区存在包括gI、gE、Us9、Us2及部分反向重复序列在内的大片段缺失的病毒，然后进一步通过药物筛选致使其TK基因部分缺失。该基因缺失弱毒疫苗株命名为PRV TP株，其微生物保藏编号为CGMCC NO.12300。本发明的弱毒疫苗株可制备成活疫苗或灭活疫苗(单苗或联苗)等，都可有效预防猪伪狂犬病，也可将其制备成诊断或治疗猪伪狂犬病的试剂。本发明的猪伪狂犬病弱毒疫苗株PRV TP株具有安全性好、保护效率高、利于鉴别诊断等优点。

技术领域

本发明涉及一株猪伪狂犬病病毒基因缺失弱毒疫苗株，还涉及该疫苗株在预防及治疗猪伪狂犬病中的应用，本发明属于医药技术领域。

背景技术

猪伪狂犬病(Porcine Pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病病毒(PorcinePseudorabies Virus,PRV)引起的一种急性传染病。哺乳仔猪感染伪狂犬病毒均出现发热及神经症状，死亡率几乎高达100％。一般情况下，成年猪感染不会出现明显发病现象，仅见打喷嚏、咳嗽、体温升高等轻微症状；妊娠母猪感染伪狂犬病病毒可导致出现流产、死胎、产弱仔和木乃伊胎；公猪感染可引起睾丸鞘膜炎。该病具有高度的传染性，极易通过空气、接触经呼吸道传播。

伪狂犬病是规模化猪场的常规免疫防控对象，一直得到了很好的控制。预防猪伪狂犬病的疫苗主要有自然缺失弱毒疫苗和基因工程缺失疫苗，目前在市场上广泛使用是自然缺失弱毒疫苗。自然缺失弱毒疫苗是通过非猪源细胞或鸡胚的连续传代，或在某些诱变剂的存在下，用低于或高于通常的培养温度在细胞培养物上连续传代获得,其基因组的内部存在着多处的点突变以及一些基因的缺失，它是一种自然的基因缺失疫苗。从20世纪60年代开始，一些国家用不同的方法培育了几株伪狂犬病弱毒疫苗株，有匈牙利的Bartha株(Bartha K61株)；罗马尼亚的Bucharest株、TK200株和BUK株；北爱尔兰的NFA-4株；保加利亚的MK25株；法国的Alfolt-26株；前苏联的VAGK-2株等，其中在国内广泛使用的是BarthaK61株。

但2011年下半年以来，有多个使用常规疫苗免疫的规模化猪场出现了疑似伪狂犬病流行的现象。我们从现地分离到病毒，命名为PRV HeN1株，通过血清中和试验和绵羊的免疫接种试验证实，在国内广泛使用的PRV疫苗株Bartha K61株免疫猪产生的中和抗体不能有效中和新分离的病毒PRV HeN1株，而且免疫Bartha K61的绵羊也不能完全抵抗PRV HeN1株的攻击。gE基因的序列分析表明，2012年分离的新流行毒株之间同源性很高，与以往发表的国内外gE基因序列相比处于一个相对独立的分支中，证实新流行毒株为PRV变异株，因此急需开发新的安全有效的PRV疫苗以应对新流行的毒株。

发明内容

本发明的目的之一是提供一株猪伪狂犬病弱毒疫苗株，用该弱毒疫苗株所制备的疫苗对于PRV变异株具有良好的保护效力。

本发明的目的之二是提供一种预防或诊断及治疗猪伪狂犬病的疫苗组合物或试剂。

本发明的上述目的分别是通过以下技术方案来实现的：