[发明专利]一种高效DC细胞培养基

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，涉及一种用于培养人类DC细胞的培养基配方及其制备方法。

背景技术

无血清培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基，可以应用于培养免疫细胞，例如淋巴细胞(例如，T淋巴细胞、B细胞、NK细胞等)、树突状细胞(也称DC细胞)、单核/巨噬细胞等。

DC细胞在体外存活和扩增需要的营养物质包括：氨基酸、维生素、糖、脂质、无机盐、生长因子等。传统的培养基为了提供这些营养因子，大多采用动物或人的血清作为添加物，比较常见的有新生牛血清、胎牛血清、人AB血清等。使用牛血清的优点是有足够的量供应，价格便宜，但是使用牛血清的缺点是有潜在传播传染病的风险，以及由于异种蛋白导致过敏症的发生，而且牛血清并不能很好的支持人DC细胞的生长(Imir,P等，Clin.Immunol.Immunopath.,36:289-296(1985))。使用人AB血清的可以很好的支持人T淋巴细胞的生长，但是人AB血清来源困难，供应量有限，而且也存在传播疾病的风险。因此，以临床应用为目的的DC细胞培养基中应尽量避免使用动物来源和人体来源的原料。

综上所述，作为治疗用的DC细胞的培养基，应该有以下几个特点：安全、稳定、廉价等。本发明着力于解决上述问题，提供了一种更加安全，质量更稳定且成本低廉的DC细胞培养基，而且其培养人DC细胞的效果与含人血清的培养基相当，部分指标优于含人血清培养基。

发明内容

本发明涉及到一种用于培养DC细胞的无血清培养基的组成成分和制备方法。为达到提高安全性的目的，避免任何因为使用含动物来源的成分或人体来源的成分可能带入的传染性疾病，本培养基所使用的所有原料均为非动物源性的原料和非人体来源的原料。本培养基通过上述方法改进，安全性优于以往的DC细胞培养基，同时培养效果得到进一步提升。

本发明提供了一种高效DC细胞无血清培养基，所述DC细胞培养基，主要成分包括基础培养基、用于替代人或牛血清的添加剂、IL-4和GM-CSF，其特征在于所述替代人或牛血清的添加剂包括重组人血白蛋白、重组人转铁蛋白以及重组人胰岛素、胆固醇、油酸、亚油酸、乙醇胺、硫酸铜、硫酸锌、氯化锰、庆大霉素。

优选的，所述DC细胞培养基中IL-4的浓度为50-100ng/ml，GM-CSF的浓度为50-100ng/ml。

优选的，所述DC细胞培养基中重组人血白蛋白的浓度为0.5g/L-5g/L，重组人转铁蛋白的浓度为5mg/L-100mg/L，重组人胰岛素的浓度为1mg/L-100mg/L，胆固醇的浓度为0.5mg/L-50mg/L，油酸的浓度为0.1mg/L-20mg/L，亚油酸的浓度为0.1mg/L-20mg/L，硫酸铜的浓度为0.0001mg/L-1mg/L，硫酸锌的浓度为0.01mg/L-10mg/L，氯化锰的浓度为0.0001mg/L-1mg/L，乙醇胺浓度为0.1mg/L-20mg/L，庆大霉素浓度为1IU/ml-100IU/ml。

优选的，所述基础培养基为IMDM培养基、DMEM/F12培养基按照1:1的比例混合而成。

具体实施方式

实施例1：培养基的配置

培养基配置方法

步骤一，配置溶液一：称取2mg胆固醇、油酸2mg、亚油酸2mg溶于1ml无水乙醇中。

步骤二，配置基础培养基：将IMDM培养基和DMEM/F12培养基按照1:1的比例混合。

步骤三，在上述每一升基础培养基中加入重组人血白蛋白3g,重组人转铁蛋白50mg，重组人胰岛素10mg，溶液一1ml,乙醇胺2mg，硫酸铜0.001mg，硫酸锌0.5mg，氯化锰0.0005mg，庆大霉素10000IU，IL-4 50ng/ml，GM-CSF 50ng/ml搅拌使充分溶解，用0.1mol/L盐酸和0.1mol/L氢氧化钠调节PH值为6.8-7.2之间，0.1um滤膜过滤除菌，分装，4-8度保存。

步骤四，热灭活自体血浆的制备。将无菌保存的血浆置于56摄氏度的水浴中，放置30分钟至45分钟，取出，3000转/分钟离心10分钟，取上清得到热灭活自体血浆。

步骤五，往步骤二中配置的培养基中加入0.5％-5％的自体血浆，得到完全培养基。

实施例2：培养基的配置

培养基配置方法

步骤一，配置溶液一：称取2mg胆固醇、油酸2mg、亚油酸2mg溶于1ml无水乙醇中。