[发明专利]快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种快速检测肿瘤组织致癌代谢物2‑羟基戊二酸2‑HG累积的试剂盒及使用方法，所述试剂盒中含有检测2‑HG的试剂及标准品及衍生化试剂；或者，所述的试剂盒中含有2‑HG的特异性抗体。采用所述试剂盒，将获得肿瘤组织样品置于离心管中加入预冷纯甲醇，匀浆机研磨静置后14000 rpm离心，取上清转移至玻璃瓶中，真空干燥离心机充分干燥后加入衍生化试剂 MTBSTFA，70℃放置，室温冷却，上机，Agilent 7890A‑5975C；色谱柱为HP‑5MS，载气为高纯氦气，采用NIST数据库搜索和标准品验证双结合的方式对2‑HG鉴定。检测结果显示，本发明的试剂盒能在术中检测脑组织中是否存在2‑HG高水平累积，有助于实现IDH1突变胶质瘤的快速鉴别诊断，并为术后的个体化治疗提供重要指导信息。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，通过该试剂盒快速检测肿瘤组织中2-HG累积，有助于IDH1突变的快速诊断。

背景技术

现有技术公开了胶质瘤（glioma）是中枢神经系统最常见的肿瘤，其中恶性胶质瘤治愈率低，复发率高，预后极差。目前临床实践中，尤其术中对于一些诊断不明确的胶质瘤病灶需要进行立体定向穿刺活检，典型者比较容易诊断，但实际操作中往往术中冰冻切片病理并不典型，病理科医生只能观察到胶质增生，而胶质增生在低级别胶质瘤、正常脑组织、炎症、部分淋巴瘤等均可出现。虽然突变型IDH1免疫组化染色可鉴别胶质瘤和其他情况，但一般需要5-7天，耗时长，且无法实现术中判断，有时甚至需要反复穿刺，增加病人负担和手术风险。

研究公开了，在大多数弥漫性人脑胶质瘤中常伴随着异柠檬酸脱氢酶基因(isocitrate dehydrogenase gene)1(IDH1)的突变. 临床实践显示，有着此突变的胶质瘤患者在临床上有良好的预后效果，并且对化疗和靶向治疗更为敏感。,因此. IDH1突变是胶质瘤一个重要的分子分型标记；IDH催化异柠檬酸氧化脱羧，生成a-酮戊二酸（a-KG），突变型IDH在丧失其正常酶活性的同时，以a-KG 为底物，生成致癌代谢物2-羟基戊二酸（2-HG）。通常，2-HG在正常脑组织中水平很低，而在IDH1突变的胶质瘤中高度累积，相关研究表明，IDH1突变细胞依赖2-HG维持其致癌特性。因此，IDH1突变快速检测，将有助于鉴别诊断胶质瘤，并利于个体化治疗方案的制定和优化，临床意义重大。基于此，本申请的发明人拟提供一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，通过检测肿瘤组织中2-HG累积，将实现IDH1突变的快速诊断。

发明内容

本发明的目地是针对现有技术的现状，提供一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，通过检测肿瘤组织中2-HG累积，为实现IDH1突变的快速诊断提供依据并为术后的个体化治疗提供重要指导信息。

具体的，本发明提供了一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒

所述的试剂盒中含有检测2-HG的试剂及标准品及衍生化试剂。

或者，所述的试剂盒中含有2-HG的特异性抗体。

本发明所述的2-HG 是突变型IDH在丧失其正常酶活性的同时，以 -KG 为底物，生成致癌代谢物2-羟基戊二酸（2-HG）。

本发明还提供了一种上述试剂盒的应用，也就是通过检测肿瘤组织中2-HG累积的来评估IDH1突变的可能，进一步实现IDH1突变的快速诊断；同时可以据此助于鉴别诊断胶质瘤，并利于个体化治疗方案的制定和优化。

所述的试剂盒通过下述步骤检测肿瘤组织中2-HG累积：

1. 获得肿瘤组织样品，置于离心管中；

2. 向上述离心管中加入预冷纯甲醇；

3.匀浆机研磨1 min，静置片刻；

4. 14000 rpm离心；