[发明专利]一种检测少儿耳聋遗传风险的引物、试剂盒、检测方法有效
申请号: | 201610651209.3 | 申请日: | 2016-08-10 |
公开(公告)号: | CN106282335B | 公开(公告)日: | 2017-08-08 |
发明(设计)人: | 黄平;欧阳小峰;毛家丽;周宇 | 申请(专利权)人: | 上海金域医学检验所有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 成都行之专利代理事务所(普通合伙)51220 | 代理人: | 马碧娜 |
地址: | 200120 上海市*** | 国省代码: | 上海;31 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 少儿 耳聋 遗传 风险 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种检测少儿耳聋遗传风险的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括PCR反应套装、PCR产物纯化套装、测序反应套装,所述PCR反应套装由以下组分组成,2.5uL 10X PCR反应缓冲液,0.2uL25mM dNTP混合液,25mM MgCl2溶液1.5ul,0.125ul 5units/ul Taq DNA聚合酶,20uM特异性引物:GCGTTTGGTCCTAGCCTTTC和GCATCTTTCCCTTGCGGTAC 0.25uL,去离子水19.175ul;所述PCR产物纯化套装:1uints/ulSAP酶0.75ul,10uints/ul Exo酶0.375ul,去离子水3.875ul;所述测序反应套装:25%BigDye mix 1μl,3.2μM DNA测序引物:GCGTTTGGTCCTAGCCTTT 1μl,125mM EDTA溶液1μl,100%乙醇溶液15μl,70%乙醇溶液30μl,HIDI溶液8μl,去离子水2μl;
该试剂盒使用方法包括以下步骤,
(1)提取DNA模板
提取口腔上皮细胞的基因组DNA;
(2)PCR扩增反应
反应体系总体积为25uL,12.5ng/ul DNA模板1uL、10X PCR反应缓冲液2.5uL,25mM dNTP混合液0.2uL,25mM MgCl2溶液1.5uL,5units/uL Taq DNA聚合酶0.125uL,20μM特异性引物各0.25uL,去离子水19.175Ul;
PCR反应条件为94℃、12分钟,进行30个循环的94℃、30秒,60℃、30秒,72℃、30秒,然后进行72℃、10分钟;
(3)PCR产物纯化
反应条件为37℃、15分钟,72℃、20分钟;
(4)DNA测序反应
使用DNA测序引物,反应体系为总体积5uL,包含PCR纯化产物1uL,25%BigDye mix 1uL,3.2μM DNA测序引物1uL,去离子水2uL,
反应条件为98℃、2分钟,进行25个循环的96℃、30秒,55℃、30秒,60℃、4分钟,
反应结束后加入125mM EDTA溶液1uL和100%乙醇溶液15uL,于室温下沉淀15分钟;在4℃以3650转/分的转速离心30分钟,轻轻倒去上清液;加入70%乙醇溶液30μl,以3650转/分的转速离心15分钟,轻轻倒去上清液;室温放置20分钟后加入HIDI溶液8μl,放入测序仪中。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海金域医学检验所有限公司,未经上海金域医学检验所有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201610651209.3/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。