[发明专利]桔青霉LB及在生物转化连翘苷制备连翘脂素中的应用

说明书

本发明公开了一种桔青霉LB及在生物转化连翘苷制备连翘脂素中的应用，所述的应用是将桔青霉LB经发酵培养后获得的湿菌体为生物催化剂，以连翘苷为底物，以甲醇为助溶剂，以含湿菌体的发酵液或将湿菌体悬浮于缓冲液中构成转化体系，于30～35℃、200～250r/min恒温振荡条件下进行转化反应，转化反应结束后，将转化液分离纯化，获得连翘脂素。在底物投料浓度为2g/L时，连翘脂素的转化得率为90.5％。桔青霉LB营养要求低、发酵时间短、抗污染能力强；生长快；转化反应专一性好，转化效率高，副产物少。

(一)技术领域

本发明属于生物化工技术领域，是关于一种以连翘苷为原料生物转化制备连翘脂素的方法。

(二)背景技术

连翘脂素(phillygenin)，又名连翘苷元(CAS号为487-39-8，分子式为C₂₁H₂₄O₆，分子量为372.41)，属于双环氧木脂素类物质。连翘脂素具有多种生物活性，包括良好的抗氧化性，表现出非常强的DPPH、ABTS、FRAP自由基清除能力及降血脂活性；连翘脂素对人肝癌细胞(SMMC27721)、人宫颈癌细胞(Hela)、中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)及小鼠黑色素肉瘤细胞(B16)具有体外抗肿瘤活性，也能降低高血脂症小鼠的血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，且可通过氧化途径来降低血脂水平；研究表明连翘脂素能预防或治疗由过氧化物引起的相关疾病，如类风湿关节炎，癌症，动脉粥样硬化和神经退行性疾病。

连翘脂素以游离状态存在于一些木犀科植物中，如连翘、流苏树和桂花等，因此可以从这些植物中分离获得，但其含量相对较低，如从产于河南的连翘叶提取连翘脂素的收率仅为0.162％(崔燕岩，冯少勇，赵光，等.连翘有效成分的HPLC法测定[J].药学学报，1992(8):603-608)。在上述植物中，连翘脂素更多的与葡萄糖结合成苷，即连翘苷(phillyrin，CAS号为487-41-2，分子式为C₂₇H₃₄O₁₁，分子量为534.56)，含量相对较高。如从产于河南的连翘叶提取连翘苷的收率可达3.14％，是连翘脂素含量的19.4倍。虽然连翘苷也具有多种生物活性，如清热解毒、排脓化瘀、抗氧化、抗病毒等药理作用，但是其口服吸收效果较差，对一些肿瘤细胞没有抑制活性。有研究报道，连翘苷在体内转化为连翘脂素后才能发挥效用。

可以看出，连翘脂素具有更好的药理活性，如将连翘苷转化为连翘脂素，对连翘资源的深度开发具有重要意义。目前，已有酶法转化的研究报道，如采用纤维素酶转化连翘苷，转化48h，转化率可达93.6％(中国发明专利CN 105331653 A)，但该方法的纤维素酶用量较大，是底物质量的1～10倍，酶的成本无疑较高；如果采用酸水解法，存在的问题则是副产物较多，构型容易转变，生成的同分异构体难以分离。

为了提高连翘脂素的生产效率，克服现有连翘脂素生产方法的不足，本发明采用微生物法转化连翘苷为连翘脂素(反应式见图1)，筛选获得了一株转化能力高、专一性好的微生物菌株，培养获得菌体，以菌体为生物催化剂，将连翘苷转化为连翘脂素，在底物浓度为2g/L时，转化得率可达90％以上。

(三)发明内容

本发明目的是提供一株产糖苷酶的微生物菌株—桔青霉(Penicilliumcitrinum)LB，及其在转化连翘苷制备连翘脂素中的应用。较好地克服现有酶解法中酶消耗量大的不足，本工艺具有成本低、流程简单、转化得率高和副产物少等优点。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株新菌株—桔青霉(Penicillium citrinum)LB，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:60050，保藏日期2016年6月27日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编：510075。