[发明专利]一种皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存试剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物分子生态学领域，特别涉及一种皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存试剂及其制备方法和应用。本发明可应用于常规PCR扩增、Real Time PCR、高通量进行微生物多样性检测等。

背景技术

随着科学技术的发展和人们生活水平的不断提高，越来越多的人意识到口腔、皮肤、生殖道微生物对人体健康有着重要的影响。随着测序技术的成熟和成本的下降，越来越多的个人和单位将口腔、皮肤、生殖道微生物检测作为身体健康检查的一项。样品的采集和保存是检测口腔、皮肤、生殖道微生物的第一步，也是关键一步。正确的采集和保存样品，可以更加真实地反应人体口腔、皮肤、生殖道微生物的多样性。

目前对于口腔、皮肤、生殖道微生物多用采集拭子采集样品。由于微生物具有顽强的生命能力，在样品采集后，样品中的微生物仍然可以利用样品自身的营养物质进行生长繁殖。若将样品长时间放在室内等普通环境中，样品中的微生物的种类和数量会发生改变，无法真实反映人体口腔、皮肤、生殖道微生物的多样性。目前最理想的样品保存方法，是将采集到的样品立即放于液氮或-80℃冰箱内冷冻保存。在一段时间内，在液氮或-80℃冰箱环境中的样品，其微生物的种类及数量不会发生显著的变化。但在许多医院、实验室、家庭无法实现用液氮或-80℃冰箱保存样品。

由于测序仪费用较高，多数医院、实验室没有测序仪，目前多数样品快递到检测公司进行检测。在运输过程中，采用干冰实现低温环境。往往1g的样品需要3-4公斤甚至10公斤以上的干冰进行寄送，运输的成本会大大提高。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一在于提供一种皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存试剂，无需冻存，即可达到稳定其中微生物及其组成的作用。在室温甚至更高温度条件下(37℃)，保存时间长达14天之久。从而使样品的保存、运输变得更加容易，可有效降低运输成本，对于样品的保护也更加安全、简便、易于实现。

本发明要解决的技术问题之二在于提供上述皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存试剂的制备方法。

本发明要解决的技术问题之三在于提供上述皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存试剂的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

在本发明的一方面，提供一种皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存试剂，包括：pH缓冲剂Tris-HCl；离子强度维持剂NaCl；蛋白变性剂十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate，SDS)；蛋白质降解剂蛋白酶K；抑菌剂乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA)；蛋白酶保护剂海藻糖。

作为优选，所述的pH缓冲剂Tris-HCl的浓度为1～50mM，pH值为7.0～8.0。

作为优选，所述的离子强度维持剂NaCl的浓度为50～500mM。

作为优选，所述的蛋白变性剂十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate，SDS)的浓度为0.1％～1％。

作为优选，蛋白质降解剂蛋白酶K的浓度为50～100μg/mL。

作为优选，所述抑菌剂为乙二胺四乙酸(EDTA)的浓度为1～100mM。

作为优选，蛋白酶保护剂海藻糖的浓度为1～100mM。

在本发明的另一方面，提供该皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存试剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将所述pH缓冲剂Tris-HCl、离子强度维持剂NaCl、抑菌剂乙二胺四乙酸混合；

(2)在上述混合试剂中，依次加入所述蛋白变性剂十二烷基硫酸钠、蛋白酶保护剂、海藻糖蛋白质降解剂蛋白酶K，充分混合均匀。

在本发明的另一方面，提供一种上述微生物保存试剂在皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存方法中的应用。

作为优选，所述皮肤、口腔、生殖道样品中的微生物保存方法为：将皮肤、口腔、生殖道样品加入项所述的微生物保存试剂中，在室温条件下保存。

作为优选，所述在室温条件下保存为在4℃～37℃环境下保存。

作为优选，所述皮肤、口腔、生殖道样品的拭子数量(个)与微生物保存试剂的体积(mL)比为2:1～1:10。

作为优选，所述保存的时间长达14天。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：