[发明专利]小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法

权利要求书

1.小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

A：取小花清风藤干燥叶，粉碎，用其质量3.95倍的甲醇超声提取；

B：将甲醇提取后得到的提取液浓缩至总提取体积的十分之一，向浓缩后的溶液中加入等体积量的纯化水，并搅拌均匀，在7℃条件下放置过夜；

C：将放置过夜的溶液抽滤，弃去沉淀，滤液浓缩至不含醇；

D：将步骤C得到的浓缩液加入其体积2倍量的纯化水稀释，用等体积的乙酸乙酯对稀释后的溶液进行萃取，将萃取液浓缩得到浸膏；

E：将步骤D得到的浸膏加入其质量1.58倍的甲醇溶解，滤去不溶物后，向甲醇溶液中加入等体积的丙酮，并搅拌均匀，在7℃的条件下放置过夜；

F：将步骤E得到的溶液进行抽滤，弃去沉淀，滤液浓缩至干，即得到6种酰胺的总生物碱样品；

G：将总生物碱样品用其质量0.79倍的丙酮溶解，加入与总生物碱样品质量相同的柱色谱硅胶，搅拌均匀，并挥去丙酮溶剂，用硅胶柱色谱进行进一步分离纯化，取总生物碱样品质量20倍的柱色谱硅胶，湿法装柱，以二氯甲烷:甲醇的体积比为10:1的溶液为起始溶剂进行洗脱，共收集3部分样品，分别命名为E1、E2、E3，E1部分为样品的绿色色带全部出柱后即停止收集，E2部分为以二氯甲烷:甲醇的体积比为10:1的溶液为起始溶剂洗脱四个保留体积的溶剂浓缩后的产物，E3部分为纯甲醇洗脱部分，E1和E3部分均弃去；

H：以二氯甲烷:甲醇的体积比为2.6:1的溶液为展开剂，将E2部分进行制备薄层分离，分别得到4个样品，分别为E2-1、E2-2、E2-3、E2-4，其中，E2-1的R_f值为0.90、E2-2的R_f值为0.56～0.60、E2-3的R_f值为0.40～0.50、E2-4的R_f值为0.20～0.26；

I：将E2-2、E2-3、E2-4进一步进行制备薄层,其中，E2-2、E2-3均以正己烷:丙酮的体积比为1.5:1的溶液为展开剂，且采取二次展开，E2-2得到两个样品分别命名为E2-2-1和E2-2-2，E2-2-1和E2-2-2的Rf值分别为0.40和0.32；E2-3得到两个样品分别命名为E2-3-1和E2-3-2，二者的Rf值分别为0.41和0.35；E2-4以正己烷:乙酸乙酯的体积比为1:2的溶液为展开剂，得到两个样品，分别命名为E2-4-1和E2-4-2，二者的Rf值分别为0.27和0.21；E2-2-1、E2-2-2、E2-3-1、E2-3-2、E2-4-1、E2-4-2分别对应6个酰胺类化合物中的1、2、3、4、5、6；1-6的结构式分别为

2.根据权利要求1所述的小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法，其特征在于，在整个分离提取过程中，温度≤50℃。

3.根据权利要求1所述的小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法，其特征在于，步骤A中，用甲醇超声提取3次，每次4小时，温度为50℃。

4.根据权利要求1所述的小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法，其特征在于，步骤C和步骤F所述抽滤所用仪器为布氏漏斗。

5.根据权利要求1所述的小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法，其特征在于，步骤G所述柱色谱硅胶的规格为100-300目。