[发明专利]高稳定的纳米金探针功能复合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物技术和生物检测领域，涉及到一种高稳定的纳米金探针功能复合物及其制备。

背景技术

目前纳米金探针功能复合物已经应用于多种领域，如纳米金探针复合物已经在多种诊断技术中作为指示剂使用，但是由于纳米金探针复合物本身能够检测的目标核酸灵敏度有限，使之在直接检测真实标本时受到限制。为能够采用纳米金探针复合物作为指示剂检测真实标本，常需要与一些酶扩增方法相偶联以增加检测灵敏度，但由于目前的纳米金探针复合物稳定性差，不能耐受酶扩增过程的热循环，且会抑制酶扩增反应，导致纳米金探针复合物只能在酶扩增反应结束后加入反应体系中指示其结果，这种方式不仅操作复杂，还增加了酶扩增反应产物交叉污染的风险，不能满足真实标本的检测。

因此本领域需要开发一种能够与酶扩增反应同时存在且不影响其性能的新型纳米金探针功能复合物及其制备方法，使之通过简单操作就能使纳米金与功能分子相连接，并能够达到耐受酶扩增热程序和对酶扩增反应零抑制的效果，从而有效提高纳米金功能复合物在生物领域的实用性。

发明内容

本发明的目的是针对现有纳米金探针功能复合物的上述不足，提供一种新的纳米金功能复合物，该纳米金功能复合物具有很好的稳定性，能够耐受强热循环和强机械冲击；具备强适用性，能够与各种酶反应液共存而不影响反应的正常进行。

实现上述目的的技术方案如下。

一种纳米金探针功能复合物，其由纳米金颗粒、连接于纳米金颗粒表面的功能核酸探针以及稳定剂构成，所述稳定剂为含有巯基基团的有机分子；稳定剂是通过其巯基基团与纳米金颗粒连接；

所述功能核酸探针具有以下结构：

HS-(M)m-Q；

HS为巯基基团；M为亚甲基、乙二醇基及其衍生物，m为1-18的整数；Q为核苷酸序列。

在其中一个实施例中，所述含有巯基基团的有机分子选自半胱氨酸、巯基乙醇、12-巯基十二酸、巯基甲氧基硅烷。

在其中一个实施例中，所述核苷酸序列的长度为10-50个碱基。

在其中一个实施例中，所述m为3-8的整数。

在其中一个实施例中，所述纳米金颗粒的平均尺寸可以为5nm-50nm。

本发明所述一种耐热且能够与核酸扩增酶反应共存的纳米金探针功能复合物由纳米金颗粒和功能核酸探针、稳定剂如巯基甲氧基硅烷在缓冲液中连接构成，核酸探针及稳定剂均是通过巯基基团与纳米金颗粒相连接构成纳米金探针功能复合物。

本发明的另一目的是提供上述高稳定的纳米金探针功能复合物的制备方法，该制备方法的过程相对简单，制备方式比较灵活。

实现上述目的的技术方案如下。

上述纳米金探针功能复合物的制备方法，包括以下步骤：

(S1)先将纳米金颗粒与功能核酸探针按1:300-1000混合；

(S2)加入氟表面活性剂，再加入缓冲液和氯化钠溶液混合均匀，室温杂交孵育，离心洗涤后重悬于缓冲液；

(S3)加入稳定剂，室温杂交孵育24h，结束后离心洗涤重悬于无离子水中。

在其中一个实施例中，(S2)中室温杂交孵育，(S3)室温杂交孵育20-30h。

在其中一个实施例中，所述氟表面活性剂为FS-10、FS-30、FS-31、FS-3100、FS-50、FSN-100中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述缓冲液可以为常规的磷酸盐缓冲液、Tris盐缓冲液、MOPS盐缓冲液。

在其中一个实施例中，纳米金颗粒与功能核酸探针按优选1:400-800混合。

所述的高稳定耐热且能够与核酸扩增酶反应共存的新型纳米金探针功能复合物制备方法，先通过纳米金颗粒与待连接探针在含有表面活性剂的缓冲液条件下孵育实现纳米金与待连接探针快速连接，再通过与含巯基稳定剂孵育使纳米金与含巯基稳定剂相连接，从而制备能够高稳定耐热且能够与酶反应共存的新型纳米金探针功能复合物。

所述的新型纳米金探针复合物能够用于闭管核酸扩增产物的检测，而同时纳米金探针功能复合物的存在不会影响核酸扩增等酶反应。

所述的高稳定耐热且能够与酶反应共存的新型纳米金探针功能复合物，在高温至90℃以上其功能能够不受影响，且能够直接应用于基于酶反应的检测实验或其他实验中而不影响酶反应或其他反应的正常进行。