[发明专利]一种鉴别水稻光敏色素基因PHYB野生型和突变体的分子标记有效
| 申请号： | 201610671769.5 | 申请日： | 2016-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN106282345B | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 郑崇珂;谢先芝;周晋军;白波;和亚男;孙伟;解丽霞 | 申请（专利权）人： | 山东省水稻研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 济南诚智商标专利事务所有限公司 37105 | 代理人： | 韩百翠 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分子标记 突变体 野生型 酶切 光敏色素 鉴别 突变位点检测 等位基因型 核苷酸序列 水稻 电泳分析 扩增产物 酶切产物 育种群体 两条DNA 基因 扩增 引物 筛选 应用 | ||
1.一种用于鉴别水稻光敏色素基因PHYB野生型和突变体的分子标记的引物，其特征是，所述引物为：
上游引物PHYBF4：5’- TGTCACACAAAGCCCCAGCATCATGGATC-3’；
下游引物PHYBR1：5’- AAGGCTATCTGTGCTGAGCC-3’。
2.权利要求1所述的引物在鉴别水稻光敏色素基因PHYB野生型和突变体中的应用。
3.一种鉴别水稻光敏色素基因PHYB野生型和突变体的方法，其特征是，
(1)利用权利要求1所述的上游引物PHYBF4和下游引物PHYBR1对水稻基因组DNA进行PCR扩增；
(2)对步骤(1)得到的PCR扩增产物进行电泳分析：
如果PCR扩增产物大小为175bp DNA片段，则为野生型
如果PCR扩增产物大小为176bp DNA片段，则为突变体
4.一种鉴别水稻光敏色素基因PHYB野生型和突变体的方法，其特征是，
(1)利用权利要求1所述的上游引物PHYBF4和下游引物PHYBR1对水稻基因组DNA进行PCR扩增；
(2)对步骤(1)得到的PCR产物进行BamHⅠ酶切并进行电泳分析：
如果PCR产物不能被BamHⅠ酶切，为175bp DNA片段，则为野生型
如果PCR产物能够被BamHⅠ酶切，酶切产物为25bp和151bp两条DNA片段的，则为突变体
5.如权利要求3或4所述的一种鉴别水稻光敏色素基因PHYB野生型和突变体的方法，其特征是，步骤(1)中所述PCR扩增采用的PCR扩增体系为20μL体系，包括如下组分：50ng/μL基因组DNA 2μL；10μM上游引物PHYBF4 0.3μL；10μM 下游引物PHYBR1 0.3μL；2×EasyTaqPCR SuperMix 10μL；ddH2O 补足20μL。
6.如权利要求3或4所述的一种鉴别水稻光敏色素基因PHYB野生型和突变体的方法，其特征是，步骤(1)所述的PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃30s，35个循环；72℃后延伸5min。
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