[发明专利]靶向VEGF与mucin1的抗肿瘤疫苗、编码基因、表达载体、表达工程菌及应用有效

专利信息
申请号: 201610673299.6 申请日: 2016-08-16
公开(公告)号: CN106279435B 公开(公告)日: 2019-06-07
发明(设计)人: 张会勇;夏文姣;贾恩朝;闫影;苏静;路臣桂;朱武凌 申请(专利权)人: 新乡医学院
主分类号: C07K19/00 分类号: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;A61K39/00;A61K47/42;A61P35/00;C12R1/84
代理公司: 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 代理人: 牛爱周
地址: 453003*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 抗肿瘤疫苗 表位 表达工程菌 编码基因 表达载体 靶向 抑制肿瘤血管生成 肝素琼脂糖凝胶 生物技术领域 肿瘤相关抗原 肝素结合域 双靶向作用 表位肽段 蛋白纯化 融合蛋白 营养供给 肿瘤细胞 抗原性 突变体 抗原 抗体 杀伤 应用 疫苗 肿瘤
【说明书】:

发明公开了一种靶向VEGF与mucin1的抗肿瘤疫苗、编码基因、表达载体、表达工程菌及应用,属于生物技术领域。抗肿瘤疫苗融合蛋白以VEGF165、VEGF165b或其相应改构的VEGF突变体为表位载体,通过在载体的N端或C端连接至少一段肿瘤相关抗原mucin1的表位肽段,构成具有双靶向作用的抗肿瘤疫苗。该疫苗中VEGF既能作为表位载体增强与之连接的mucin1表位的抗原性,杀伤过表达mucin1的肿瘤细胞,其自身又能作为抗原,产生针对VEGF的抗体,抑制肿瘤血管生成,切断肿瘤的营养供给。同时,表位载体具有肝素结合域,可以与肝素琼脂糖凝胶结合,有利于后续的蛋白纯化操作。

技术领域

本发明涉及一种靶向VEGF与mucin1的抗肿瘤疫苗,同时还涉及编码该抗肿瘤疫苗的基因、抗肿瘤疫苗表达载体、表达工程菌及应用,属于生物技术领域。

背景技术

目前,恶性肿瘤已成为国民健康的最大威胁。而肿瘤常规治疗方法如手术、放化疗等均有其各自的局限,这也使得免疫治疗成为继常规疗法之后的一种补充疗法。在免疫疗法中,各种针对肿瘤相关抗原或免疫检验点的单抗在肿瘤治疗中起着至关重要的作用。但其代价高昂,需要长期给药,且存在肿瘤细胞易产生抗性等问题。理论上,肿瘤疫苗具有高度特异性,其利用患者自身的免疫系统产生抗肿瘤反应,可产生长期的免疫记忆以阻止肿瘤复发。另外,肿瘤疫苗相对容易制备,与常规疗法相比具有副作用小、特异性高、作用持续时间长等优点。在临床实验中已证实能够有效预防肿瘤复发。

肿瘤的发生与发展过程极为复杂,仅依靠对单一靶点的作用抑制肿瘤生长与转移是极为不现实的。所以肿瘤疫苗靶向的多靶标已成为目前疫苗研究的一个共识。Kaumaya等研究认为同时靶向VEGF和HER2的肿瘤疫苗能够为癌症的免疫治疗提供一种新范式(FutureOncol,2012)。

Mucin1(MUC1)是一种黏蛋白,在正常组织中均有表达,但在前列腺癌、胃癌、子宫颈癌、乳腺癌等的上皮恶性肿瘤中过表达,且其N端胞外域变低或者异常糖基化,且随着碳水化合物侧链的缩短,核心肽上覆盖的表位暴露出来。由于不完全糖基化,核心肽骨架上数目可变的串联重复区域也暴露出来,成为一个潜在的细胞与体液免疫反应的靶标。其中,位于mucin1蛋白串联重复区的一个肽段由B细胞(弱)及T细胞联合表位(STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPP)组成,在临床实验中已显示在某种程度上可对抗早期发现的小肿瘤或者防治已接受手术等常规疗法的过表达mucin1患者的肿瘤复发与扩散(Pol J,2015)。但是,由肽段组成的表位疫苗往往存在分子量小、免疫原性弱等问题,易于降解,因此需要与载体蛋白连接以增强其免疫原性,延长半衰期。

在过去十年中,针对VEGF-A的抗血管治疗已经普遍用于各种肿瘤治疗中(CritRev Oncol Hematol,2014)。研究认为,阻断VEGF不仅能够抑制血管生成,还有助于打破肿瘤诱导的免疫抑制(Voron T,2014)。所以,同时靶向VEGF和肿瘤相关抗原mucin1,从理论上讲既可以通过抑制血管生成干扰肿瘤细胞的营养供应,又可以诱导出靶向过表达mucin1的T细胞,直接靶向肿瘤细胞对其进行杀伤,达到协同抗肿瘤的效果。

目前,国内外多数研究集中在将肿瘤相关抗原作为靶标,尤其是多表位抗原,用牛血清蛋白或者铜蓝蛋白作为载体增强免疫反应。然而却未有将VEGF蛋白作为肿瘤表位载体的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种靶向VEGF与mucin1的抗肿瘤疫苗融合蛋白,其中VEGF既作为表位载体增强与之连接的mucin1表位的抗原性,杀伤过表达mucin1的肿瘤细胞,其自身又作为抗原,产生针对VEGF的抗体,抑制肿瘤血管生成,切断肿瘤营养供应,具有双靶向作用。

同时,本发明还提供一种编码上述融合蛋白的基因。

再者,本发明提供一种靶向VEGF与mucin1的抗肿瘤疫苗表达载体和表达工程菌。

最后,本发明再提供一种抗肿瘤组合物及相关应用。

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