[发明专利]一种用于抑制簇集蛋白基因表达的成套siRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种用于抑制簇集蛋白基因表达的成套siRNA及其应用。本发明提供的siRNA，由正义链和与其反向互补的反义链组成；所述正义链由19‑27个核苷酸组成，且所述正义链从5’末端起5‑9个连续核苷酸和从3’末端起5‑9个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰。本发明的实验证明，上述siRNA分子混合物提高了寡核酸抑制基因表达的概率；整体上提升了抑制效率；同时降低了脱靶效应；且其在应用过程中，省去了前期对单一RNAi分子的复杂设计、筛选、验证与优化的过程，操作简单、节省成本，是一种通用、有效、快速的RNAi工具。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种用于抑制簇集蛋白基因表达的成套siRNA及其应用。

背景技术

RNAi广泛存在于自然界的物种中，自Andrew Fire和Craig Mello等人1998年在线虫(Caenorhabditis elegans)中首次发现RNAi现象，Tuschl和Phil Sharp等人2001年证实在哺乳动物中也存在RNAi之后，关于RNAi的机制原理、基因功能和临床应用等研究取得了一系列的进展；RNAi不仅在防御病毒感染，防转座子跳跃等多种机体保护机制中发挥关键作用(Huntvagner et al,2001；Tuschl,2001；Waterhouse et al,2001；Zamore 2001)，其相关产品也是十分有前景的候选药物。

簇集蛋白(Clusterin，CLU)是异二聚体硫酸糖蛋白(sulfatealglycoprotein，SGP-2)，最早于1983年在睾丸液中分离出来，其后发现CLU广泛存在于人类及动物的许多组织中，如：睾丸、附睾、肾脏、心脏、肺脏、子宫、卵巢、乳腺及前列腺，也几乎存在于包括血浆、乳汁、尿液、脑脊液和精液等所有体液中。其中，其在睾丸、附睾、肝、肾等脏器表达较高。簇集蛋白是一种多功能蛋白，参与多种生理生化过程，如介导细胞聚集、参与脂质交换和运输、稳定细胞膜、促进生殖功能等；最近发现，其在细胞周期调节、细胞凋亡、DNA损伤，细胞黏附，组织重塑中也起到重要作用。

由于选择性剪接的结果，Clusterin有两种主要的亚型：分泌型Clusterin(sCLU)和核型Clusterin(nCLU)。sCLU是Clusterin的主要形式，其具有细胞保护作用，是一种相对分子量为76-80ku的糖基化蛋白。研究发现簇集蛋白的分泌型蛋白质(sCLU))在EMT(上皮至间充质转变)期间受到刺激，并且本身可以促进EMT过程(Lenferink,A.E.,C.Canti等人(2009).“Transcriptome Profiling of a TGF-beta-induced epithelial-to-mesenchymal transition reveals extracellular clusterin as a target fortherapeutic antibodies.”Oncogene29:831)，而EMT会导致肿瘤侵袭和化疗抗性。用能与sCLU中特定区域相互作用的寡核酸阻断EMT，可导致肿瘤生长抑制和针对细胞毒药物的反应增加。

Clusterin在肿瘤的发生和发展中可能起着重要的作用(Oncogene.，2004，23，2298-304)，对其抑制剂的开发有利于对Clusterin相关疾病(如肿瘤)的机制研究与药物研制。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种抑制或降低靶基因CLU表达的siRNA。

本发明提供的siRNA，由正义链和与其完全反向互补的反义链组成；

所述正义链由19-27个核苷酸组成，且所述正义链从5’末端起5-9个连续核苷酸和从3’末端起5-9个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰；

所述反义链与所述靶基因CLU上的区段反向互补。

抑制率至少为65％，70％，75％，80％，85％，90％。