[发明专利]人乳腺癌细胞株特异性核酸适配体及其在制备检测、诊断和治疗人乳腺癌制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种特异性识别和结合人乳腺癌细胞株的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:6中的任意一条序列所示；或者在SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:6中的任意一条序列的基础上进行化学修饰、化学标记或碱基的改变。本发明还公开了一种用于检测和诊断人乳腺癌的试剂盒。本发明还公开了一种分子探针。本发明还公开了核酸适配体在设计和制备检测、诊断和治疗人乳腺癌制剂中的应用。本发明在乳腺癌的检测、诊断和治疗中具有非常广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医学与临床医学技术领域，涉及人乳腺癌细胞株特异性核酸适配体及其在制备检测、诊断和治疗人乳腺癌制剂中的应用，特别涉及一种人乳腺癌细胞株SK-BR-3特异性核酸适配体及其在制备人乳腺癌的检测和诊断试剂盒以及治疗性药物或者制剂中的应用。

背景技术

乳腺癌是一种高度异质化的肿瘤，其在女性群体中的发病率仅次于肺癌，是世界上女性罹患的第二大肿瘤疾病。近年来，乳腺癌的发病率和死亡率都有上升的趋势，给人们的生命财产带来了巨大的威胁。而乳腺癌的早期诊断和治疗则能够在很大程度上控制肿瘤的恶化进程，提高肿瘤病人的康复率。因此，研发一种高效、快速、特异和灵敏的人乳腺癌的早期诊断和治疗方法对战胜乳腺癌具有非常重要的临床意义。

核酸适配体(aptamer)是上世纪90年代发展起来的，通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)，以靶标包括蛋白、多肽、小分子、细胞等与人工设计和合成的RNA/单链DNA随机文库孵育，经过多轮重复筛选得到的一段能够与靶标特异性结合的短寡核苷酸片段。与抗体相比，核酸适配体对靶物质的结合表现出更强的亲和性、特异性和稳定性，因而被形象地称为“化学抗体”。近年来在SELEX技术的基础上发展起来的Cell-SELEX技术，由于能够实现完整复杂系统靶标的核酸适配体的筛选，而受到大家的追捧。通过Cell-SELEX技术筛选得到的核酸适配体，其特异性、亲和性和实用性都得到了很大的提高。此外，核酸适配体分子量小、获取途径简单、易修饰、无免疫原性，在生物传感、生物识别、分子影像、药物输送等生物医学领域具有广阔的应用前景。

发明内容

发明目的：针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种特异性高、亲和性强、稳定性好和实用性广的人乳腺癌细胞株SK-BR-3特异性核酸适配体及其衍生物。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种用于检测和诊断人乳腺癌的试剂盒。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种分子探针。

本发明还要解决的技术问题是提供了该核酸适配体及其衍生物在制备人乳腺癌检测和诊断试剂盒以及治疗性药物或者制剂中的应用。

技术方案：本发明提供了一种特异性识别和结合人乳腺癌细胞株的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:6中的任意一条或几条序列所示；或者在SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:6中的任意一条序列的基础上进行化学修饰、化学标记或碱基的改变。

本发明涉及的六条核酸适配体是以人乳腺癌细胞株SK-BR-3为靶细胞，人乳腺癌细胞株MDA-MD-231、MCF-7和人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A为对照细胞，经过连续21轮筛选得到。该核酸适配体具有分子量小、稳定性好、易修饰、无免疫原性的优点，可用于人乳腺癌检测、诊断和分子分型相关试剂盒以及人乳腺癌相关治疗性药物或者制剂的研制。所述的核酸适配体包括以下核苷酸序列中任意一条序列所示的DNA片段：

序列1：

5'-AGCAGAGTTCACGACCCGATAAGGGGAAAACACATTTCGGATCTCCGTTGTCGCCCTGATACCGAGTTACATACCAATCGTCGCAG-3'

序列2：