[发明专利]一种促进靛蓝生物合成转化产量的方法

权利要求书

1.一种生物合成靛蓝的方法，包括：

(1) 提供靛蓝生物合成细胞，其为大肠杆菌细胞，该细胞共表达细胞色素P450酶和Prefoldin蛋白；所述的细胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突变为G、第87位由F突变为V、第188位由L突变为Q、第168位由D突变为H；所述Prefoldin蛋白的α亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亚基是氨基酸序列如SEQID NO: 2的蛋白；

(2) 培养(1)的靛蓝生物合成细胞，加入吲哚为底物，生物合成靛蓝。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，在细胞内共表达细胞色素P450酶和Prefoldin蛋白的方法包括：

(a) 提供表达载体，所述的表达载体含有细胞色素P450酶表达盒和Prefoldin表达盒；

(b) 将(a)表达载体转化宿主细胞，从而在细胞内共表达细胞色素P450酶和Prefoldin蛋白。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，还包括：在细胞内共表达选自以下的分子伴侣蛋白：热休克蛋白60，小热休克蛋白或它们的组合。

4. 一种提高细胞内NADPH/NADP⁺比率的方法，包括：在细胞内表达外源的Prefoldin蛋白，该细胞为大肠杆菌细胞；所述Prefoldin蛋白的α亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 2的蛋白。

5. Prefoldin蛋白的用途，用于促进大肠杆菌细胞合成靛蓝，所述大肠杆菌细胞是表达细胞色素P450酶的细胞；或用于提高大肠杆菌细胞内NADPH/NADP⁺比率；所述的细胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突变为G、第87位由F突变为V、第188位由L突变为Q、第168位由D突变为H；所述Prefoldin蛋白的α亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 2的蛋白。

6. 一种靛蓝生物合成细胞，其为大肠杆菌细胞，该细胞中含有细胞色素P450酶表达盒和Prefoldin表达盒，能共表达细胞色素P450酶和Prefoldin蛋白；所述的细胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突变为G、第87位由F突变为V、第188位由L突变为Q、第168位由D突变为H；所述Prefoldin蛋白的α亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 2的蛋白。

7. 如权利要求6所述的靛蓝生物合成细胞，其特征在于，该细胞中还含有选自以下的分子伴侣蛋白的表达盒：热休克蛋白60，小热休克蛋白，或它们的组合。

8.用于靛蓝生物合成的试剂盒，所述试剂盒中包括：含有细胞色素P450酶表达盒和Prefoldin表达盒表达载体；或者

所述试剂盒中包括：共表达细胞色素P450酶和Prefoldin蛋白辅靛蓝生物合成细胞，所述细胞为大肠杆菌细胞；

其中，所述的细胞色素P450酶是氨基酸序列如SEQ ID NO: 3的蛋白且其氨基酸序列第74位由A突变为G、第87位由F突变为V、第188位由L突变为Q、第168位由D突变为H；所述Prefoldin蛋白的α亚基是氨基酸序列如SEQ ID NO: 1的蛋白，β亚基是氨基酸序列如SEQID NO: 2的蛋白。