[发明专利]超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法

权利要求书

1.一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是包括以下步骤：

（1）在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案，将设计好的打印图案通过蜡打印机打印在色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在130 ℃加热50秒使蜡融化并渗透整个色谱纸的厚度，形成疏水墙；

（2）在计算机上设计与步骤（1）中获得的蜡打印图案相匹配的工作电极、对电极和参比电极的印刷图案，并利用丝网印刷技术在步骤（1）中获得的蜡打印色谱纸上印刷碳工作电极、碳对电极和Ag/AgCl参比电极；

（3）利用原位生长法在步骤（2）中获得的碳工作电极的工作区域生长三维花状的金；

（4）将伴刀豆球蛋白A修饰在步骤（3）中获得的纸芯片的工作区域，采用牛血清白蛋白封闭非特异性结合位点，然后利用伴刀豆球蛋白A捕获癌细胞；

（5）将AgNPs修饰的多枝杂交链固定在步骤（4）中获得的纸芯片的工作区域；

（6）将GQDs修饰在步骤（5）中获得的多枝杂交链上；

（7）在步骤（6）中获得的多枝杂交链上沉积AgNPs；

（8）在步骤（7）中获得的纸芯片的工作区域，滴加10 μL包含0.1 M K₂S₂O₈的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液（PBS），在电压范围为0 ~ -1.6V进行ECL信号检测，光电倍增管电压为800 V，绘制ECL强度与癌细胞浓度的标准曲线，实现对癌细胞的检测。

2.根据权利要求书1所述一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是，所述的利用原位生长法在步骤（2）中获得的碳工作电极的工作区域生长三维花状的金的具体步骤为：

（1）合成金纳米粒子：首先将90 mL 二次水置于单口烧瓶中并加热到90 ℃，然后加入0.8 mL 1% 氯金酸，继续水浴加热到96 ℃，待反应进行1 min后，再加入2.8 mL 1%柠檬酸钠，在磁力搅拌下反应15 min，获得酒红色的溶液；

（2）取10-20 μL金纳米粒子滴加到工作区域，在室温下静置反应30-60 min，用二次水洗涤除去多余的金纳米粒子，取10-20 μL新鲜制备的氯金酸和抗坏血酸的混合溶液滴加到工作区域，所述的氯金酸的浓度为10-15mM，抗坏血酸的浓度为80-120 mM，在室温下生长20-40 min后，用二次水清洗工作区域并在室温下自然干燥30 min。

3.根据权利要求书1所述一种超灵敏检测癌细胞的电致化学发光细胞传感器的制备方法，其特征是，所述的将伴刀豆球蛋白A修饰在步骤（3）中获得的纸芯片的工作区域，采用牛血清白蛋白封闭非特异性结合位点，然后利用伴刀豆球蛋白A捕获癌细胞的具体步骤为：取10 μL伴刀豆球蛋白A滴到纸工作区域，在室温下孵化30 min，用pH 7.4 PBS洗涤除去多余的伴刀豆球蛋白A后，滴加10 μL 1%的牛血清白蛋白用于封堵非特异性结合位点，利用pH7.4 PBS洗涤后，继续滴加10 μL不同浓度的癌细胞，在37 ℃下孵化40 min，随后用pH 7.4PBS洗涤除去未反应的癌细胞。