[发明专利]一种刺五加注射液的成分检验方法

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种刺五加注射液的成分检验方法，更具体涉及对刺五加注射液中12种主要成份的含量测定方法。

背景技术

刺五加注射液为刺五加经提取加工而制成的灭菌水溶液，有平补肝肾，益精壮骨之功能，主治肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作，脑动脉硬化，脑血栓形成，脑栓塞等。刺五加的化学成分主要包括苯丙酸类、香豆素类、木脂素类、含氮碱基类、糖、氨基酸等。

由于刺五加注射液中成分种类较多，其中主要化学成分包括苯丙素类、三萜类、黄酮类、含氮化合物、糖类等。目前还没有一种检测分析方法能够较为全面、快速、准确地检测刺五加注射液中的主要成分及含量。通常是对其中的各类成分进行单独检验。

例如，现有对刺五加注射液中总苷类物质的含量测定方法为：以紫丁香苷为对照品，依照分光光度法在265nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总苷的含量。而对总苷类中的具体成分，则是分别采用不同方法测定。例如，中国专利申请201210049755公开了紫丁香苷和刺五加苷E含量的检测方法，采用超高效液相色谱法，应用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，柱温为40℃，流速为每分钟0.3mL，检测波长为220nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于30000，刺五加苷E峰的分离度应达到1.5，梯度洗脱程序如下：0分钟时，流动相为5％的乙腈和95％的体积比为0.1％的磷酸溶液；3.2分钟时，流动相为9.2％的乙腈和90.8％的体积比为0.1％的磷酸溶液；10.0分钟时，流动相为22％的乙腈和78％的体积比为0.1％的磷酸溶液；12.0分钟时，流动相为100％的乙腈；15.0分钟时，流动相为5％的乙腈和95％的体积比为0.1％的磷酸溶液。

又例如，现有对刺五加注射液中总糖类物质的测定方法为以葡萄糖为对照品，依照分光光度法在490nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总糖的含量。

上述方法虽然能够快速获得刺五加注射液中的某类成分的含量，但是无法对该类物质所包含的具体成分进行定量分析，需要分别针对各个成分进行含量测定，分析测定过程相对较为繁复，耗时较长。

另一方面，中国专利申请200410044162公开了一种刺五加指纹图谱检测方法。该方法虽然高效液相色谱的方法实现了一次检测识别出刺五加中的14个成分峰。然而上述方法的分离度较低，多个成分峰之间存在明显重叠；准确性较低，基线不平稳，背景干扰严重；除紫丁香苷以外，没有识别出其他刺五加苷类物质、核苷类物质、黄酮类物质以及绿原酸等化合物，也没有提供标准参照；没有提供各个成分的浓度计算的线性回归方程，也就无法直观快速的进行各成分浓度的计算；重复性和准确性相对较低。

中药注射液由于其成分相对较为复杂，因此质量控制的难度也相对较大。就刺五加注射液而言，含有多种活性成分，如何能够一次将其中的主要活性成分检测出并进行定量，对其生产制造以及临床使用中的质量监控非常重要，然而现有技术并未很好地解决这一问题。

综上所述，提供一种刺五加注射液的成分检验方法，能够快速高效地对其中的主要活性成分进行检测定量，是其生产制造和临床应用中亟待解决的重要问题。

发明内容

本发明中涉及的超高效液相色谱简称为UPLC；高效液相色谱简称为HPLC。

如未特别说明，本发明中涉及的百分含量，例如“2％的甲醇溶液”指体积百分比，即“2％的甲醇溶液”指100mL溶液里含有2mL甲醇。

如未特别说明，本发明中涉及的某溶液，例如“甲醇溶液”指其水溶液，即“甲醇溶液”指以水为溶剂的甲醇溶液。

如未特别说明，本发明中涉及的水指超纯水。

本发明的目的是提供一种刺五加注射液的成分检验方法。

所述的刺五加注射液的成分检验方法包括能同时检测胞苷、尿苷、腺苷、鸟苷、5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、刺五加苷B、隐绿原酸、异嗪皮啶和刺五加苷E，12个主要成分的UPLC含量测定方法。

所述的UPLC含量测定方法包括以下步骤：

(1)、供试品溶液的制备：量取待测刺五加注射液，加入甲醇溶液，摇匀后使用0.22μm的微孔滤膜过滤，收集滤液，即为供试品溶液；