[发明专利]一种非人哺乳动物中风或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途

说明书

本发明提供了一种非人哺乳动物中风或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途，具体地，本发明提供了一种非人哺乳动物的中风或其相关疾病动物模型的制备方法，包括以下步骤：(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的Glce基因失活，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞；(b)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的细胞，制备得到Glce基因失活的中风或其相关疾病动物模型。本发明的动物模型是一种有效的中风或其相关疾病动物模型，可用于研究中风等疾病，并可以用于特定药物的筛选和测试试验。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种非人哺乳动物中风或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途。

背景技术

脑中风是一组以脑部缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病，又称脑卒中或脑血管意外，具有极高的病死率和致残率，主要分为出血性脑中风(脑出血或蛛网膜下腔出血)和缺血性脑中风(脑梗塞、脑血栓形成)两大类，以脑梗塞最为常见。脑中风发病急，病死率高，是世界上最重要的致死性疾病之一

目前脑中风的致病机理尚未研究清楚，没有安全有效的治疗手段，因此深入探讨其发病机理是治疗脑中风的重要基础。利用小鼠模型探索脑中风的发病原因和致病机理，是研究安全有效的治疗脑中风的方法的重要手段。小鼠疾病模型在研究人类疾病的致病机理和药物筛选中起到了非常重要的作用。在探究人类的认知功能、神经退行性疾病、神经精神疾病等方面，小鼠模型具有巨大的优势。

基因敲除是上世纪80年代发展起来的一项复杂的分子生物学技术，其基于小鼠胚胎干细胞DNA同源重组原理，也称为“基因打靶”技术。其后利用这项技术构建了数千种基因突变小鼠，这些基因工程小鼠不仅为生物科学和医学的研究带来了突破，也在新药研发中发挥了至关重要的作用。

然而目前的中风动物模型的建立方法存在以下问题：1.与临床中风病人发生症状差别较大；2.脑梗死面积过大；3.易出现饲养中死亡等问题。

此外，目前已有的建立中风模型的方法大多要经过机械的或其它物理的、化学的方法处理，甚至是通过手术手段，不能完全模拟人类的原发性中风，并且存在如手术复杂、实际操作较困难，创伤较大，死亡率高等缺点，尤其是存在与临床中风病人发生症状差别较大，脑梗死面积过大，易出现饲养中死亡等问题。

因此，本领域迫切需要开发一种可以最大程度地模拟临床上原发性的中风，没有脑梗死面积过大的问题，也有利于研究中风的发病机制以及药物靶点并进行针对性的治疗药物设计，而且个体之间不存在手术操作或者药物剂量导致的差异，其遗传背景高度一致，可以作为研究中风的发病机理和新药筛选的有力工具的动物模型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以最大程度地模拟临床上原发性的中风，没有脑梗死面积过大的问题，也有利于研究中风的发病机制以及药物靶点并进行针对性的治疗药物设计，而且个体之间不存在手术操作或者药物剂量导致的差异，其遗传背景高度一致，可以作为研究中风的发病机理和新药筛选的有力工具的动物模型。

本发明的第一方面提供了一种非人哺乳动物的中风或其相关疾病动物模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的Glce基因失活，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞；

(b)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的非人哺乳动物细胞，制备得到Glce基因失活的中风或其相关疾病的动物模型。

在另一优选例中，在步骤(a)中，还包括如下步骤：

(a1)利用DNA同源重组技术，将所述Glce基因中的外显子3至外显子5中的一个或多个外显子剔除或中断，并用筛选标记替换，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞。

在另一优选例中，在步骤(b)中，还包括如下步骤：