[发明专利]高效液相色谱法分析分离托吡司他及其杂质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及托吡司他中间体杂质分离与分析方法，尤其是一种高效液相色谱法。

背景技术

托吡司他，化学名4-[5-(吡啶-4-基)-1H-[1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-甲腈，英文名： Topiroxostat，商品名：TOPILORIC，是一种非嘌呤类黄嘌呤氧化还原酶选择性抑制剂，用于治疗痛风、高尿酸血症。由日本富士药品株式会社及三和化学研究所共同研发，2012年6月 向日本厚生劳动省提交上市申请，2013年6月28日，托吡司他片获得批准。

中国申请的专利CN1561340，最早公开了托吡司他的合成路线，对于合成托吡司他的过程中引入的中间体杂质，不论是在原料药还是制剂中都是需要进行严格控制的，托吡司他中间体中的光学杂质去除不完全，将会引入到原料药终产品中，从而影响药物纯度和质量，所以发现一种托吡司他中间体光学异构体分析分离的方法具有现实意义。

申请人发现，用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱(C18(250×4.6mm，5μm))，采用0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 值至3.0)-甲醇＝50∶10为流动相，可以将托吡司他及其杂质快速有效的分离，很好的控制托吡司他及其制剂的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析托吡司他的纯度和含量并能有效的控制中间体杂质。

发明内容

本发明提供了一种快速分析分离托吡司他中间体杂质的高效液相色谱法，从而实现了托吡司他中间体杂质的分离测定。

本发明所说的用高效液相色谱法分离与分析托吡司他中间体异构体杂质的方法，是选择以氨基键合硅胶或烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，以一定比例的有机相-缓冲液为流动相。

上述所说的以氨基键合硅胶或烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，优选十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱。

本发明的流动相中的有机相选自甲醇、乙腈、四氢呋喃，优选甲醇。

本发明的流动相，有机相-缓冲液的的比例为10∶85～35∶65，优选10∶50。

本发明的流动相中所选用的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液，最优选磷酸二氢钾缓冲液，缓冲液的浓度范围为0.01mol/L～0.05mol/L，优选0.01mol/L。

本发明所述的分析分离方法，可以依照以下方法实现：

(1)取待处理样品适量，用甲醇溶解，配制成每1ml中含0.1mg的样品溶液。

(2)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为210nm，色谱柱温度为室温。

(3)取(1)的混合样品溶液20μl注入液相色谱仪，完成托吡司他中间体杂质的分离与分析。

本发明通过选择适当的固定相和流动相，以及适当的测定条件，为准确的完成托吡司他的分析分离提供一种可靠的方法。

附图说明

图1：按照实施例1条件分离的托吡司他中间体杂质HPLC图

具体实施方式：

实施例1

仪器：SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器；

色谱柱：C18(250×4.6mm，5μm)；

流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-甲醇＝10∶50

流速：1.0mL/min

检测波长：210nm

柱温：室温

进样体积：20μl

试验步骤

称取托吡司他与中间体杂质各10mg，同置于10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为混合样品溶液；另分别称取托吡司他及中间体杂质，分别置于10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 5ml置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为定性对照溶液。

分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图1。图1中保留时间为10.761min的色谱峰为托吡司他，其余色谱峰为托吡司他各有关物质的色谱峰，由图可以看出托吡司他与有关物质能够达到基线分离，符合中国药典的要求。