[发明专利]一种鉴定蜈蚣的PCR方法

权利要求书

1.建立一种鉴定蜈蚣的方法：提取蜈蚣样品的DNA，通过PCR扩增、电泳检测等过程，鉴定蜈蚣及其提取物、极限条件提取物和制剂的真伪。

2.权利1的特征在于可以鉴定混合制剂中蜈蚣的真伪，过程包括下列步骤：

1)制备样品：蜈蚣粉末，蜈蚣水提物和醇提物、极限(高温、高压、长时间)条件提取的蜈蚣水提物和醇提物，蜈蚣与其他蛇类药材的混合制剂和极限(高温、高压、长时间)条件处理的蜈蚣与其他动物类药材的混合制剂。

2)样品DNA提取：从样品中提取DNA。

3)PCR反应：采用PCR方法得到PCR产物，93～95℃5min，30～40个循环(95℃30～45s，55～65℃30～45s，72℃30～45s)，72℃5min，得到扩增产物。

4)电泳鉴定：根据扩增产物大小，鉴定蜈蚣真伪。

3.权利2中样品：蜈蚣粉末，蜈蚣水提物和醇提物，极限条件提取的蜈蚣水提物和醇提物，蜈蚣混合制剂，极限条件处理的蜈蚣制剂：

1)蜈蚣粉碎，得蜈蚣细粉。

2)采用加热冷凝回流法提取，温度为100℃，料水比为1∶10，时间为2h，提取三次得蜈蚣水提物和醇提物。

3)将蜈蚣水提物和醇提物，121℃高压30min，得极限条件提取蜈蚣水提物和醇提物。

4)将几种动物类药材混合得到混合制剂，将混合制剂采用加热冷凝回流法提取，得到混合水提物和混合醇提物，利用121℃高压30min得到极限条件处理的制剂、混合水提物、混合醇提物。

4.权利2中蜈蚣DNA提取：采用消化、离心、纯化的方法制备。

5.权利2中特异引物，其序列为：

上游引物：5’-GGTATGGAATGGAAGGTGGGT-3’

下游引物：5’-TCATCACACATACACGGGACG-3’ 。

6.权利1中PCR反应体系采用25μL，包括：模板1μL，引物0.5μL，PCR Mix 12.5μL，ddH₂O10.5μL。

7.PCR反应条件：采用PCR方法得到PCR产物，95℃5min，40个循环(95℃30s，55℃30s，72℃30s)，72℃5min，得到扩增产物。

8.权利2中电泳：1.5％凝胶、130V电泳30min，210bp处有单一条带，则确定所检材料为蜈蚣。