[发明专利]一种AaADH1基因启动子及其应用与制备方法

权利要求书

1.一种启动子，其特征在于，所述启动子为AaADHl(青蒿醇脱氢酶1)基因启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID N0:1所示。

2.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于，所述AaADHl基因启动子为诱导型启动子。

3.含有根据权利要求1所述启动子的表达盒、重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒。

4.根据权利要求3所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒由根据权利要求1所述的启动子、由根据权利要求1所述的启动子启动转录的目的基因和终止子组成。

5.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pCAMBIA1391Z-AaADHl，融合了所述AaADHl基因启动子与GUS报告基因，如SEQ ID N0:1所示的DNA片段通过HindIII和NcoI酶切位点插入pCAMBIA1391Z载体。

6.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌为经pCAMBIA1391Z-AaADHl载体转化的根癌农杆菌。

7.根据权利要求1所述的启动子在利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中的应用。

8.根据权利要求7所述的启动子在利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中的应用，其特征在于，所述代谢产物为青蒿素。

9.一种根据权利要求1所述的启动子的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

步骤一、培养青蒿无菌苗；

步骤二、根据青蒿全基因组中AaADHl基因启动子序列，克隆启动子序列；

步骤三、分析调控基因在分泌型腺毛中表达的启动子上面的顺式作用元件，确定所述启动子类型；

步骤四、将克隆到的所述启动子通过酶切连接连入pCAMBIA1391z载体中；

步骤五、将步骤四中构建好的所述载体转化根癌农杆菌；

步骤六、将步骤五中带有载体的根癌农杆菌稳定转化青蒿；

步骤七、PCR检测转基因植株；

步骤八、确定所述启动子所引导的GUS报告基因在植株中表达部位。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，为构建pCAMBIA1391z载体，正向引物中引入HindIII酶切位点，反向引物中引入NcoI酶切位点，引物序列如下所示：

HindIII-proADHl-FP:CCCAAGCTTAAAGTATGGAATGTTGGTAAATA

NcoI-proADHl-RP:CATGCCATGGTTTAATCAAATCGTTTAGTTAG。