[发明专利]检测肿瘤相关的50个热点突变基因的捕获文库和试剂盒

说明书

本发明公开一种检测肿瘤相关的50个热点突变基因的试剂盒及方法，其针对肿瘤学研究相关的50个基因(包括致癌基因和抑癌基因)的207个热点突变区域的捕获方法，以及捕获使用的液相杂交文库的制备方法。具体为选取207个热点突变区域的序列信息，设计PCR引物，利用PCR方法制备生物素标记的液相杂交捕获文库，利用其与构建好的靶标基因组DNA文库杂交，对捕获到的片段进行高通量测序和生物信息学分析，从而获得样本的核酸序列位点变异情况。本发明提供的方法，可获得高质量的测序数据，具有更高捕获效率和更好的靶标位点的均一性捕获，解决了固相杂交的效率低、均一性差等缺点，大大的降低了测序成本。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，涉及一种用于检测癌症相关基因的试剂盒及检测方法，具体涉及杂交的序列捕获文库的制备方法及技术。

背景技术

恶性肿瘤，俗称癌症，据统计癌症已经成为我国城乡居民的首要死因。近百年来，人们对于癌症的研究一直没有间断，但具体病因仍然不能确定。随着科学进步发展，科学家们发现癌基因与抑癌基因在癌症发生上起到关键作用。癌基因(oncogene)一般可定义为某种基因，它的异常表达或表达产物的异常直接决定细胞恶性表型的产生。现已知道在肿瘤发生中，作为环境因素的病毒、化学致癌物和射线，它们作用于机体内的靶分子都是DNA，导致原癌基因的激活引发癌症发生。癌基因可以促进细胞增殖与迁移，可以抑制细胞分化和凋亡，其在肿瘤细胞中大量表达。抑癌基因(tumor-suppressor gene)存在于正常细胞中，在被激活情况下它们具有抑制细胞增殖与迁移，调节细胞凋亡的作用，它们的丢失、突变或失去功能，使激活的癌基因发挥作用而致癌。近年来随着基因组学的发展，不少基因检测为主的研究项目已经取得标志性的阶段成果，尤其对于癌症的诊断预防具有不可替代的优势。

20世纪初，人们认识到癌症是一种遗传病，并且在整个20世纪，科学家们开展了大量的细致、有突破性的研究来发掘癌症的发生发展与基因之间的联系。在研究的过程中，涌现了许多先进的技术和研究手段，使得科学家们更高效地找到了更多与癌症相关的遗传变异，其中细胞遗传学技术逐渐崭露头角，例如荧光原位杂交(FISH)和比较基因组杂交(CGH)技术广泛应用于鉴定染色体变异，揭示癌症生物学的重要信息。随后一代测序技术广泛应用于目标区域测序，并且鉴定了许多热点突变基因。到20世纪90年代，基因芯片技术的发展使得人们有机会更大规模地研究癌症相关基因。