[发明专利]一种抗凝血酶Ⅲ检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种抗凝血酶Ⅲ免疫比浊法检测试剂盒。

背景技术

抗凝系统是维持机体出血与止血平衡的重要因素之一，当抗凝系统中某些因子的数量或功能发生改变的时候，就有可能导致出血或血栓形成。抗凝血酶（Antithrombin，AT）是人体抗凝系统的主要因子之一，约占抗凝系统总活性的50%~70%，它与人体各类疾病的发生有着密切的联系。

抗凝血酶Ⅲ是由肝脏合成的，含糖15%且具有一定耐热性的一种α2-微球蛋白。它具有分解脂蛋白的作用，对凝血系统中几乎所有的活性丝氨酸蛋白酶都有抑制作用，在肝素的协同作用下，可以和凝血因子中的Ⅱa、Ⅻa、Ⅺa、Ⅸa、Ⅹa等结合，抑制这些因子，特别是抑制凝血酶的活性。近年来，抗凝血酶Ⅲ的临床价值越来越受到广泛关注。动脉疾病（动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗塞和其它血栓疾病）、血液疾病（急性早幼粒细胞白血病、原发性血小板减少性紫癜）、急性胰腺炎、败血症导致的休克、含雌激素的避孕药等都会导致抗凝血酶Ⅲ活性下降。先天性抗凝血酶Ⅲ缺陷患者中抗凝血酶Ⅲ活性为正常人的30%~60%。往往幼年就易出现血栓，发病常在儿童期。肝脏是抗凝血酶Ⅲ合成的重要器官，因此，肝病时对抗凝血酶Ⅲ影响很大，测定抗凝血酶Ⅲ的活性有诊断价值。

目前，用于抗凝血酶Ⅲ的检测方法主要有免疫透射比浊法和发色底物法，本发明提供一种用免疫透射比浊法检测抗凝血酶Ⅲ的试剂盒，优化其反应体系，使其操作简单、重复性好、稳定性好、可进行批量样本全自动化检测，从而有利于在市场中进一步的推广使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定性好的用于检测抗凝血酶Ⅲ的试剂盒，该试剂盒采用免疫透射比浊法。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性和线性相关性比常规的检测试剂盒要好，有利于试剂在临床上推广应用。

基本原理：

以免疫透射比浊法为测定原理，当样本与试剂混合后，样本中的抗凝血酶Ⅲ与羊抗人抗凝血酶Ⅲ抗体特异性的结合，形成抗原-抗体复合物，使溶液产生浊度，在340nm波长下检测，该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。通过与同样处理的校准液比较，计算未知样本中抗凝血酶Ⅲ的含量。

发明是通过以下步骤得到的：

一种抗凝血酶Ⅲ检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1和试剂R2。试剂组成如下：试剂R1为 pH 6.8 PIPES缓冲液、1% TritonX-100、50mmol/L氯化钠、10mmol/L叠氮钠；试剂R2为 pH 6.8 PIPES缓冲液、2mg/mL羊抗人抗凝血酶Ⅲ抗体、2%聚乙二醇6000、10mmol/L叠氮钠。

所述的抗凝血酶Ⅲ检测试剂，试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1：R2=200：100，在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上利用终点法进行测定，检测主波长为340nm，其具体使用方法如下：

加入生理盐水、样本或校准品3μl，再加入200μl 的R1试剂，预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入100μl的R2试剂，反应5min后读取吸光度A2，并计算ΔA。

本发明的有益效果：

1）采用新的缓冲体系，改善了试剂的稳定性；

2）添加2%的聚乙二醇6000，增强了试剂的稳定性，而且不会对试剂的准确度产生影响；

3）试剂的准确度和稳定性好，价格便宜，使用方便，有利于该试剂在市场中进一步推广。

附图说明

图1为两种试剂的相关性曲线图，

图2为两种试剂效期稳定性曲线图；

图3 准确度验证试验中该发明试剂与市场认可的抗凝血酶Ⅲ检测试剂对比检测结果；

图4 实施例1试剂与对照组试剂线性相关验证实验检测结果；

图5 实施例1试剂与对照组试剂稳定性验证实验检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

一种常规的抗凝血酶Ⅲ检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2。

其中试剂R1组成为：

PIPES缓冲液 pH 6.8

TritonX-100 1%

氯化钠50mmol/L

叠氮钠10mmol/L

试剂R2组成为：

PPIPES缓冲液pH 6.8

羊抗人抗凝血酶Ⅲ抗体2mg/mL

聚乙二醇60002%

叠氮钠10mmol/L。