[发明专利]一种发酵液中提取纯化他克莫司的方法

权利要求书

1.一种发酵液中提取纯化他克莫司的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1发酵液的固液分离：向发酵液中，加入发酵液体积1％(w/v)的硫酸锌、1％(w/v)的无水氯化钙和2％(w/v)的硅藻土，搅拌，过滤，收集滤渣；

S2丙酮浸提：向所述滤渣中以6mL/g滤渣的比例加入丙酮，超声提取2次，超声的频率为35kHz，时间为25min，过滤并合并滤液，得到浸提液；

S3浸提液浓缩及大孔树脂处理：将所述浸提液减压浓缩得到第一浓缩液，经大孔树脂LX1180柱床吸附，大孔树脂柱床与第一浓缩液的体积比为1：6，使用6倍大孔树脂柱床体积的体积浓度35％的丙酮溶液进行冲洗，柱床温度为18℃，然后使用1.5倍大孔树脂柱床体积的体积浓度70％的丙酮溶液进行解吸，收集解吸液；

S4解吸液处理：将所述解吸液减压浓缩得到第二浓缩液，加入第二浓缩液3倍体积的乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩得到油状物，加入油状物2倍体积的正己烷溶解，得到待层析液；

S5硅胶柱层析：将所述待层析液上硅胶柱层析，柱温20℃，使用正己烷、乙酸乙酯和醋酸组成的洗脱组合物进行洗脱，洗脱包括：正己烷、乙酸乙酯和醋酸以4：2：0.2的体积比组成的组合物5倍柱体积，然后正己烷、乙酸乙酯和醋酸以2：4：0.2的体积比组成的组合物12倍柱体积，收集12倍柱体积部分，得到含他克莫司的层析液；

S6层析液处理：将所述层析液减压浓缩得到第三浓缩液，加入第三浓缩液3倍体积的乙酸乙酯萃取2次，加入乙酸乙酯体积5％的正己烷，冷却至4℃析晶，收集晶体，真空干燥，得到他克莫司。