[发明专利]一种酵母细胞表达的狂犬病毒的病毒样颗粒及其制备方法有效
| 申请号： | 201610753601.9 | 申请日： | 2016-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN107779458B | 公开（公告）日： | 2023-06-20 |
| 发明（设计）人： | 周东明;马小伟;成涛;朱睿;安文琪;潘若文 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海巴斯德研究所;华兰生物工程股份有限公司;华兰生物疫苗有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/47 | 分类号： | C12N15/47;C12N15/81;C12N7/00;A61K39/205;A61P31/14 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 酵母 细胞 表达 狂犬病毒 病毒 颗粒 及其 制备 方法 | ||
1.一种制备狂犬病毒的病毒样颗粒的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)将狂犬病毒的糖蛋白表达盒和基质蛋白表达盒引入到酵母细胞中，糖蛋白的编码序列如SEQ ID NO:1，基质蛋白的编码序列如SEQ ID NO:2；培养该重组酵母细胞使之表达糖蛋白和基质蛋白；且将酪氨酸酶相关蛋白酶2整合元件引入到酵母细胞中；所述的糖蛋白表达盒及基质蛋白表达盒是以甲醇为诱导表达试剂的表达盒；培养该重组酵母细胞时，以甲醇诱导使所述重组酵母细胞表达糖蛋白和基质蛋白，甲醇在培养基中的浓度为按照体积比0.4～0.8％；培养该重组酵母细胞使之表达糖蛋白和基质蛋白的时间为20～30小时；所述的酵母细胞为毕赤酵母；
(2)去除该重组酵母细胞的细胞壁，获得原生质体；和
(3)培养该原生质体，细胞内表达的糖蛋白和基质蛋白，包装成病毒样颗粒，该病毒样颗粒的直径为120±20nm。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，培养该重组酵母细胞使之表达糖蛋白和基质蛋白的时间为24小时，之后进行步骤(2)。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，甲醇在培养基中的浓度为按照体积比0.5％。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酵母细胞为毕赤酵母Pichia-MG。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：
(4)分离所获得的病毒样颗粒。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，采用离心的方法来纯化所获得的病毒样颗粒。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该病毒样颗粒为椭圆形颗粒。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病毒样颗粒用于制备防治狂犬病毒感染的疫苗。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，制备酵母细胞的原生质体的试剂包括：蜗牛酶，破壁酶。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，制备酵母细胞的原生质体的试剂还包括：Tris，山梨醇，EDTA和DTT。
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