[发明专利]果蝇S2细胞瞬时转染的方法

说明书

本发明涉及一种果蝇S2细胞瞬时转染的方法，其包括如下配置转染试剂溶液、配置转染复合物及瞬时转染等步骤。该果蝇S2细胞瞬时转染的方法使用几丁聚糖作为转染试剂，转染效率较之多聚赖氨酸、脂质体或磷酸钙等转染试剂有明显提高，蛋白产品也显著提高。在分析含目的DNA的质粒与转染试剂形成的转染复合物的大小后发现，几丁聚糖与含目的DNA的质粒形成的转染复合物最小。几丁聚糖作为转染试剂具有价格低廉、操作简单且转染后蛋白产量较高的优点，可适用于果蝇S2细胞的大规模瞬时转染，可在较低成本短时间内获得大量重组蛋白。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其是涉及一种果蝇S2细胞瞬时转染的方法。

背景技术

昆虫细胞表达系统已被广泛用于包括组织因子和抗体等在内的众多人类重组蛋白的表达(Kosr等，1997)。目前，昆虫表达系统主要用于表达亚单位疫苗，包括兽用疫苗以及部分人类疫苗及重组病毒(Maranga等，2002；Ryan和walsh等，2012；Yang等，2013；Miller等，2012)。果蝇S2(Drosophila Schneider 2)细胞是一种常用于异源基因表达的双翅目果蝇科果蝇属的昆虫细胞，可通过构建稳定细胞池的方法进行重组蛋白表达，近年来已成功用于表达一些具有生物活性的受体蛋白、离子通道蛋白、细胞骨架蛋白、转录因子、激素和凝血因子等(Millar等，1995；Millar等，1994；Tota等，1995；Towers和Sattelle等，2002；Mennella等，2005；Winslow等，1989；Change等，2005；Zmora等，2007；Vatandoost等，2012)。

但稳定细胞池的生产过程耗时长达几个月并且产量很低，每升的产量只能达到几毫克。瞬时转染在哺乳动物中用于重组蛋白的快速表达的工艺已非常完善，近年来也逐渐应用到昆虫表达系统中(Geisse等，2009；Hopkins等，2012；Loomis等，2005；Shen等，2013)。但由于表达量低和没有找到高效低成本的的转染试剂等原因，果蝇S2细胞的瞬时转染目前只用于构建稳定细胞株之前对表达载体的检验(Vatandoost等，2012)。果蝇S2细胞的瞬时转染常用的转染试剂为磷酸钙或脂质体，操作繁琐、价格昂贵，不利于工艺放大，使其应用受到了限制(Cherbas等，2007)。目前还没有低成本的阳离子聚合物转染试剂在果蝇S2细胞转染中的应用(Hacker等，2013)。

发明内容

基于此，有必要提供一种成本低且转染效率高的果蝇S2细胞瞬时转染的方法。

一种果蝇S2细胞瞬时转染的方法，包括如下步骤：

配置转染试剂溶液：将几丁聚糖溶于pH 3-10无菌水中，配置成浓度为0.1-10g/ml的转染试剂溶液；

配置转染复合物：按照几丁聚糖与待转染的含目的DNA的质粒的质量比为1-20:1的比例将所述转染试剂溶液与待转染的含目的DNA的质粒溶液加入无菌水中，震荡混匀，形成转染复合物；

瞬时转染：将所述转染复合物加入已传代培养的果蝇S2细胞悬液中，摇晃培养，得到已转染含目的DNA的质粒的果蝇S2细胞。

在其中一个实施例中，所述几丁聚糖的分子量范围为50-300kD。

在其中一个实施例中，所述几丁聚糖的分子量范围为50-190kD。

在其中一个实施例中，在所述配置转染试剂溶液过程中，所述无菌水的pH为5.0-7.0。

在其中一个实施例中，在所述配置转染试剂溶液过程中，配置的转染试剂溶液中几丁聚糖的浓度为0.1-1g/ml。

在其中一个实施例中，在所述配置转染复合物过程中，是按照几丁聚糖与待转染的含目的DNA的质粒的质量比为5:1的比例配置。